Efeito do interferon-gama sobre defeitos de splicing em doença granulomatosa crônica e em pacientes com deficiência de IFNGR

Resumo

O sistema NADPH oxidase fagocítico humano é responsável pela geração de superóxido e outros reativos intermediários do oxigênio, críticos na defesa contra patógenos. Defeitos neste sistema resultam na doença granulomatosa crônica (DGC), cujo quadro clínico caracteriza-se por infecções recorrentes graves, o que demonstra a relevância deste sistema enzimático. Neste projeto propomos aprofundar a pesquisa desenvolvida no decorrer do mestrado (Bolsa Fapesp 06/51005-9), onde foi visto que o tratamento com IFN-g modificou o padrão de expressão do gene CYBB, além de alterar o padrão de marcação dos fatores antinúcleo sobre as proteínas do "spliceossoma". Dessa forma, pretendemos verificar o papel do IFN-v sobre o processamento da mensagem do gene CYBB por proteínas do "spliciossoma", sua expressão final e ativação do sistema NADPH oxidase. Investigaremos o efeito do IFN-g sobre eventos pré e pós transcricionais relativos à expressão do gene CYBB que codifica o componente gp91-phox em leucócitos de indivíduos normais e de pacientes com DGC ligada ao X, ocasionada por defeitos de "splicing". O objetivo principal desta proposta de trabalho é investigar os efeitos do IFN-g na expressão de genes envolvidos em eventos transcricionais relacionados a expressão e regulação do gene CYBB, e outros genes do sistema imune inato que sofrem splicing alternativo. Visamos também avaliar os genes relacionados ao processo de splicing em leucócitos de indivíduos normais, em pacientes com DGC e em pacientes com deficiência de receptor de INF-g (IFNGR). O uso de uma ferramenta de alta resolução e qualidade para avaliar este assunto em um nível de transcriptoma seria capaz de responder vários questionamentos que ainda não foram respondidos sobre o processo de regulação envolvido no mecanismo de splicing de vários genes da imunidade inata. Esta proposta de trabalho pode prover um entendimento mais compreensivo sobre o mecanismo de splicing que regula a expressão de genes da imunidade inata e também sobre a complexidade dos transcriptomas eucariotos envolvidos no reconhecimento através da quantificação de exons, introns, termino das regiões 5' e 3' e pela identificação de sítios iniciadores da transcrição, bem como as formas variantes de splicing. (AU)