Efeito do interferon-gama na expressão gênica e splicing de leucócitos de pacientes com doença granulomatosa crônica

Resumo

Sequenciamento de RNA de alto rendimento (RNA-seq) é um método poderoso para a descoberta, a identificação de perfil e a quantificação de transcritos de RNA, tornando em possível sua utilização para a identificação de eventos de splicing. No entanto, a necessidade de análise de dados de RNA-seq e interpretação continua sendo um grande obstáculo para muitas pesquisas e aplicações clínicas. Um dos principais objetivos deste projeto é identificar os genes diferencialmente expressos na Doença Granulomatosa Crônica (DGC) pelo tratamento in vitro com IFN-³. A DGC é uma doença caracterizada por infecções recidivantes graves devido a defeitos genéticos que causam uma diminuição da função do sistema NADPH oxidase de fagócitos humano, um sistema crítico para a geração de superóxido e outros reativos intermediários do oxigênio e na defesa contra patógenos. O nosso grupo demonstrou que o IFN-³ interfere no processamento do RNAm aumentando a expressão do gene CYBB que codifica a proteína gp91-phox e atua a nível pré-transcricional aumentando a quantidade de transcritos e proteínas envolvidas no processo de splicing em indivíduos saudáveis e em pacientes com DGC. Por meio do uso da tecnologia de RNA-seq e ferramentas personalizadas de bioinformática para selecionar especificamente genes com base em uma combinação de alteração de limite de expressão e valores de corte, baseados nos valores de P gerados por modelagem estatística, nosso objetivo é ser capaz de identificar diferentes padrões na dinâmica do processo de splicing e alterações transcriptômicas que ocorre durante o processamento de RNAm que são induzidos pelo IFN-³ em leucócitos de indivíduos normais e de pacientes com DGC ligado ao X ocasionado por defeitos de splicing. Este trabalho proposto visa avançar na compreensão do mecanismo de splicing que regula a expressão de genes relacionados com a linhagem mielóide (Proc. Fapesp 2012/51094-2 e 2013/50460-8). (AU)