Desenvolvimento de Vetores Não-Virais para Terapía Gênica e Vacinação por DNA: Superação das Barreiras à Entrega Gênica

• Processo: 09/12635-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Adriano Rodrigues Azzoni
• Beneficiário: Marianna Teixeira de Pinho Favaro
• Instituição Sede: Centro de Biologia Molecular e Engenharia Genética (CBMEG). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 07/58323-9 - Estudo e desenvolvimento de proteínas de fusão para o transporte intracelular de vetores não virais através de proteínas motoras, AP.JP
• Assunto(s): Proteínas recombinantes Proteínas Terapia genética
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Proteinas recombinantes | terapia genica | tráfego intracelular de pDNA | vacinação por DNA | Vetores não-virais | vírus artificiais | Proteínas

Resumo

Um dos principais limitantes do desenvolvimento de protocolos mais eficientes de terapia gênica e vacinação com DNA provém da baixa eficiência de transferência gênica por parte de vetores não-virais. Isso surge, principalmente, da dificuldade de transporte do DNA estrangeiro do exterior para o núcleo das células alvo, devido à presença de inúmeras barreiras físicas, enzimáticas e difusionais. O principal objetivo do projeto aqui proposto é o desenvolvimento de vetores não-virais multifuncionais ("virus artificiais") capazes de realizar eficientemente a entrega de material genético (DNA plasmidial, pDNA). Introduzindo-se novos domínios à proteínas de fusão atualmente em estudo por nosso grupo (TcTex-1 e RP3), espera-se avaliar de forma sistemática a capacidade destas proteínas de auxiliar a superação destas barreiras. O aumento da eficiência de entrada na célula e translocação para o núcleo será estudado através da inclusão de domínios "membrano-ativos" (Tat e Penetratina) nestas proteínas. O escape dos vetores retidos em endossomas será avaliado através da utilização de sequências de histidina. O transporte intracelular de pDNA através de microtúbulos será estudado explorando-se a capacidade natural da proteína motora Dineína para o transporte de cargas da periferia para o interior das células. Em todas as etapas do estudo, o número de vetores de pDNA presentes no interior e núcleo das células transfectadas será quantificado através de real time PCR, e a eficiência de transfecção através da expressão dos genes repórteres Luciferase e GFP. Espera-se, dessa forma, levantar informações importantes sobre alguns dos principais mecanismos envolvidos em etapas cruciais do tráfego intracelular de transgenes. Outro resultado esperado é o desenvolvimento de vetores multifuncionais capazes de reduzir a diferença de eficiência existente atualmente entre vetores não-virais e virais.

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

FAVARO, Marianna Teixeira de Pinho. Desenvolvimento de vetores não virais para entrega gênica baseados na cadeia leve de dineína Rp3. 2012. Dissertação de Mestrado - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia Campinas, SP.