Análise da autofagocitose durante a agregação proteica contendo alfa-sinucleína e tau hiperfosforilada em cultura de células do hipocampo, substância negra e locus coeruleus

• Processo: 13/07942-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Merari de Fátima Ramires Ferrari
• Beneficiário: Vinícius de Andrade Torrecillas
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia celular Proteínas tau Hipocampo Degeneração neural Substância negra alfa-Sinucleína Locus cerúleo
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Alfa-sinucleína | beclina | p62 | rab7 | tau hiperfosforilada | ulk1 | neurodegeneração

Resumo

Alterações na estrutura e composição bioquímica das células, formação de placas senis e neurofibrilares são características comuns do encéfalo em processo degenerativo. Esses emaranhados neurofibrilares são constituídos essencialmente por proteína tau hiperfosforilada. A presença desses agregados proteicos leva a prejuízos intracelulares que culminam em morte celular. A falha nas vias de degradação celular pode favorecer a agregação de proteínas intra e extracelulares e culminar com a neurodegeneração. Desta forma, pretende-se analisar a expressão de proteínas envolvidas no sistema de autofagia celular, a formação dos autofagolisossomos e a co-localização dos autofagossomos com a tau hiperfosforilada e a alfa-sinucleína, a fim de estudar a relação da autofagocitose com a formação dos agregados proteicos. Para essa análise, serão empregados anticorpos específicos para a detecção de proteínas da via de autofagocitose tais como Rab7, p62, Ulk1 e Beclina-1, além de anticorpos para a marcação da proteína tau hiperfosforilada e da alfa-sinucleína. A análise da formação dos autofagolisossomos será feita utilizando-se sondas fluorescentes as quais marcam organelas ácidas com cores distintas dependendo da faixa do pH. O estudo será realizado em culturas primárias de células do hipocampo, substância negra e locus coeruleus submetidas a exposição a rotenona em concentrações de 0,1 a 0,5nM, sendo que esta última concentração já determina a presença de agregados proteicos contendo tau hiperfosforilada e alfa-sinucleína nas células de estudo. (AU)