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Papel do receptor P2X7 e da ectonucleotidase CD39 em linfócitos T regulatórios foliculares na Malária experimental

Processo: 20/01197-6
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de abril de 2020
Vigência (Término): 30 de novembro de 2021
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
Pesquisador responsável:Maria Regina D'Império Lima
Beneficiário:Paulo Henrique Lisboa Raeder
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:15/20432-8 - Intervenção em vias de sinalização associadas ao reconhecimento de dano celular visando reduzir a patologia das formas graves de malária e tuberculose, AP.TEM
Assunto(s):Malária   Plasmodium   Receptores purinérgicos P2X7   Linfócitos T

Resumo

A Malária é das doenças infecciosas mais prevalentes na espécie humana, sendo responsável por mais de 500 mil de mortes anuais mundialmente. A resposta imune contra o plasmódio auxilia no controle da infecção mas também pode contribuir para a sua severidade. A morte necrótica causa a liberação de ATP, um sinal de dano para as células do sistema imune que ativa as respostas inflamatórias e de reparo tecidual. O ATP também pode ser liberado por células ativadas e apoptóticas através de um canal denominado panexina-1, o que resulta na sinalização celular autócrina e parácrina. O receptor P2X7 está presente em células do sistema imune e se ativa com concentrações elevadas de ATP extracelular. Um estudo nosso publicado recentemente mostrou o envolvimento do ATP e do receptor P2X7 na proteção contra a Malária causada pelo Plasmodium chabaudi AS (PcAS). Esse receptor contribui para a diferenciação dos linfócitos T CD4+ helper 1 (Th1) em detrimento dos linfócitos T CD4+ helper foliculares (Tfh), que cooperam com linfócitos B para a produção de anticorpos. Além disso, a ausência do receptor P2X7 leva à redução da população de linfócitos T regulatórios (Treg) ativados (CD122+). Baseado nas considerações acima, o objetivo deste projeto é estabelecer o papel do receptor P2X7 na geração e atividade dos linfócitos T regulatórios foliculares (Tfr) na Malária experimental. Para facilitar as análises dos linfócitos Tfr, utilizaremos camundongos C57BL/6 FoxP3-GFP P2X7-/-, cujas células esplênicas serão comparadas com aquelas dos camundongos C57BL/6 FoxP3-GFP. Os seguintes parâmetros serão avaliados nas fases aguda e crônica da infecção pelos parasitos PcAS: (A) A expressão de marcadores funcionais (CD25, CD39, CD44, CD62L, CD69, CD73, CD122, PD-1, CXCR5, A2A, ICOS, GITR e CTLA-4) e fatores de transcrição (T-bet e Bcl6), assim como a produção de citocinas reguladoras (IL-10 e TGF-b); (B) A atividade supressora em relação à produção de anticorpo IgG por linfócitos B estimulados com eritrócitos parasitados na presença de linfócitos Tfh, assim como a ativação de linfócitos B; (C) A expressão de mRNAs relacionados à diferenciação de linfócitos T CD4+ e função de linfócitos Tfr; (D) A resposta ao eATP, avaliando-se a proliferação, produção de citocinas e a atividade reguladora, assim como a entrada de Ca2+ e a translocação nuclear de NFAT (nuclear factor of activated T-cells); (E) Os mesmos parâmetros descritos nos itens A-D obtidos em camundongos C57BL/6 CD28-/- transferidos com linfócitos Tfh (CD4+FoxP3-ICOS+CXCR5+), juntamente com linfócitos Tfr (CD4+FoxP3+ICOS+CXCR5+) de camundongos C57BL/6 Foxp3-GFP+ ou de camundongos C57BL/6 Foxp3+P2rx7-/-, que foram previamente infectados. Essa última abordagem permite verificar a importância da expressão do receptor P2X7 nas células TFR para a regulação da resposta imune de linfócitos Tfh e B. Esse estudo contribuirá para compreender como os sinais de dano afetam a resposta imune contra o plasmódio. (AU)