| Processo: | 19/16033-1 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Data de Início da vigência: | 01 de novembro de 2021 |
| Data de Término da vigência: | 31 de março de 2023 |
| Área de conhecimento: | Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos |
| Pesquisador responsável: | Julia Pinheiro Chagas da Cunha |
| Beneficiário: | Juliana Nunes Rosón |
| Instituição Sede: | Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil |
| Vinculado ao auxílio: | 18/15553-9 - Indo a fundo na regulação da cromatina de Trypanosoma cruzi: identificação de novas moléculas e questionando seu possível impacto no controle da transcrição, AP.JP2 |
| Assunto(s): | Biologia molecular Trypanosoma cruzi RNA polimerase II CRISPR-Cas9 Sequenciamento de cromatina por imunoprecipitação Epigênese genética |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | epigenética | histona | transcricao | Trypanosoma cruzi | Biologia Molecular |
Resumo Trypanosoma cruzi é um flagelado causador da Doença de Chagas. Ele transita entre seus hospedeiros vertebrados e invertebrados, alternando constantemente em formas replicativas e infectivas. Por ser um Tripanossomatídeo, possui particularidades em sua biologia molecular, como a transcrição de longas regiões policistrônicas. Ainda não foram descritas regiões promotoras específicas para cada gene, indicando que a regulação gênica acontece principalmente a nível pós-transcricional. Estudos de transcrição global mostraram diferentes níveis de transcrição entre formas de vida, que são acompanhados por mudanças na conformação da cromatina. Marcas epigenéticas, como histonas variantes, estão presentes na cromatina dos tripanossomatídeos e principalmente enriquecidas nas regiões de início e de término de transcrição. Nosso grupo identificou, por proteômica quantitativa, uma variante da histona H2B- H2B.V que está aumentada nas formas infectivas de T. cruzi. No presente estudo, objetivamos identificar as regiões de início e de final de transcrição deste organismo, utilizando ChIP-seq de proteínas associadas à cromatina (H2B.V, H3, RPB9 - subunidade da RNA pol II, e H4.V) e ensaios de transcritos nascentes. No início do doutorado da proponente, foram realizados ensaios de ChIP-seq da H2B.V e da H3 e detectou-se enriquecimento nas dSSRs, tDNAs e regiões entre compartimentos genômicos conservados (principalmente genes codificadores de proteínas) e interrompidos (regiões não sintênicas, principalmente fatores de virulência). Para a conclusão do doutorado e proposta deste projeto, pretendemos gerar parasitas expressando RPB9 (uma subunidade RNA Pol II) e H4.V marcados com ty1 por CRISPR Cas9, para investigar sua localização genômica por ensaios ChIP-seq. Por fim, compararemos os resultados com os dados de ensaios de transcritos nascentes (GRO-seq). Acreditamos que este projeto permitirá esclarecer melhor os mecanismos de regulação da transcrição, além de determinar com precisão as regiões de início e término da transcrição em T. cruzi. (AU) | |
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