| Processo: | 99/11121-4 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Mestrado |
| Data de Início da vigência: | 01 de agosto de 2000 |
| Data de Término da vigência: | 31 de julho de 2002 |
| Área de conhecimento: | Ciências da Saúde - Medicina - Anatomia Patológica e Patologia Clínica |
| Pesquisador responsável: | Maria de Fatima Sonati |
| Beneficiário: | Simone Bordignon de Jorge |
| Instituição Sede: | Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Globinas alfa Hemoglobinopatias Análise de sequência de DNA Mutação |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Genes Da Globina Alfa | Hemoglobinopatias | Sequenciamento De Dna | Sscp |
Resumo Mutações nos genes da globina alfa humana levam à produção de Hbs anômalas e de talassemia alfa. Os métodos mais usados no rastreamento de mutações são o Denaturing Gradient Gel Eletrophoresis (DGGE), o Single-Strand Conformation Polymorphism (SSCP) e a Análise de Heteroduplexes (AH), alternativamente ao sequenciamento completo dos genes. Em função da elevada composição de G-C dos genes alfa, a eficiência destes métodos, neste caso, acaba sendo reduzida, tornando necessário, na maioria das vezes, o seqüenciamento total dos 6 exons (3 exons/gene, 2 genes). Alguns autores têm tentado adaptar as técnicas de rastreamento às características destes genes, para permitir uma maior desnaturação, amplificação e seleção de fragmentos mutantes. O objetivo do presente trabalho é comparar o SSCP e a AH com o seqüenciamento gênico na detecção de mutações nos genes alfa. O SSCP será testado em 2 sistemas (Phast System e Gene-Phor, ambos da Pharmacia, com coloração pela prata), e em 2 condições diferentes (Ayala, 1996 e Harteveld, 1997). A AH será realizada através da técnica de Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE), com gel comum e MDE. O seqüenciamento será realizado em "linha reta", empregando 3 das 4 bases do DNA. Diferentes mutações, previamente identificadas, serão testadas em cada método. (AU) | |
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