Expressão do sistema retroviral pCLpG medido em recipientes de transplante de medula óssea

• Processo: 03/08822-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Bryan Eric Strauss
• Beneficiário: Paula Fratini
• Instituição Sede: Instituto do Coração Professor Euryclides de Jesus Zerbini (INCOR). Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP (HCFMUSP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 00/12156-5 - Estratégias de regulação transcricional em produção e expressão de retrovírus, AP.JP
• Assunto(s): Terapia genética Transplante de medula óssea Modelos animais Elementos reguladores de transcrição
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Controle De Transcricao | Modelo Animal | P53 | Retrovirus | Terapia Genica | Transplante De Medula Ossea

Resumo

O retro vírus é uma ferramenta de transferência gênica largamente utilizada em ensaios de laboratório e em protocolos clínicos. Vários protocolos de sistemas retrovirais vêm sendo desenvolvidos para protocolos de aplicação ex vivo e in vivo. Desenvolvemos um novo vírus, chamado pCLPG, com expressão viral sob comando do p53, um supressor de tumor e um ativador indutível de transcrição, já verificado em cultura de células. Pretendemos caracterizar e validar a expressão do sistema pCLPG in vivo, utilizando um modelo animal de transdução de células da medula óssea (CMO) do camundongo C57BL/6 seguido por transplantação em animais recipientes previamente irradiados para abolir o sistema hematopoiético. Com o transplante, o sistema hematopoiético será reconstituído com o CMO transduzido. A expressão do eGFP será detectada por citometria de fluxo em células do CMO, sangue, timo e baço recuperado dos recipientes. Pretendemos recolher DNA genômico destas células para avaliação da inserção do provírus, medindo o número de cópias inseridas e identificando o sítio de integração. Se for bem sucedido, esperamos observar que o sistema pCLPG expressará o gene repórter mesmo depois da diferenciação das células tronco transduzidas, com integração de 1 até 3 provírus por célula, não sofrendo metilação, e não provocando proliferação clonal. Esperamos observar que o vírus parental e não modificado, pCLeGFP, não será expressado nos recipientes devido à metilação do LTR. A validação do sistema pCLPG em modelos animais, exaustivamente estudada e bem sucedida suporta a indicação de que estes vírus poderão ser desenvolvidos para aplicação em futuros protocolos. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

FRATINI, PAULA; STRAUSS, BRYAN E.. Serial bone marrow transplantation reveals in vivo expression of the pCLPG retroviral vector. VIROLOGY JOURNAL, v. 7, JAN 22 2010. (07/50210-0, 00/12156-5, 03/08822-8)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

FRATINI, Paula. Expressão do vetor retroviral pCLPG medido em receptores de transplante de medula óssea.. 2009. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.