Estudo da composição de proteínas na área de invasão de carcinoma epidermóide de boca por proteômica baseada em espectrometria de massas

Autor(es)

Carolina Moretto Carnielli

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2018-01-08

Membros da banca

Adriana Franco Paes Leme; Alexandre Keiji Tashima; Diana Noronha Nunes; Daniel Guariz Pinheiro; Mariane Tami Amano

• Orientador: Adriana Franco Paes Leme

Resumo

Câncer de cabeça e pescoço é um grupo de câncer que envolve a cavidade oral, faringe e laringe. A maioria dos casos é de carcinoma oral de células escamosas ou epidermóide (CEC), o qual apresenta alta morbidade. Em câncer, mudanças no estroma dirigem a invasão e metástase, cujos processos são característicos da malignidade. Evidências recentes sugerem que a área do fronte invasivo dos carcinomas, ou seja, na interface do tumor-hospedeiro, apresenta perfil molecular e características morfológicas diferentes em comparação a outras áreas do mesmo, sendo considerada como uma região de interesse para a identificação de potenciais assinaturas de prognóstico. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi identificar as proteínas presentes no estroma do fronte invasivo do tumor em comparação ao estroma do interior do tumor. Para isso, a microdissecção a laser (LMD) foi associada à espectrometria de massas (MS), técnicas consideradas de alta robustez quando combinadas para a identificação e quantificação de proteínas em tecidos tumorais de regiões específicas. Vinte amostras teciduais fixadas em formalina e parafina de CEC de língua foram utilizadas para isolar o estroma da região do fronte invasivo e o estroma do interior de tumores por LMD, seguida de extração e digestão das proteínas e análise por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas in tandem por proteômica baseada em descoberta (LC-MS/MS). A partir das análises, incluindo análises estatísticas e a correlação com os dados clínico-patológicos dos pacientes, cinco proteínas foram encontradas estatisticamente significantes em relação as suas abundâncias entre as regiões do fronte invasivo e do interior do estroma tumoral. As abundâncias de COL6A1 (Collagen alpha-1(VI) chain), FSCN1 (Fascin-1), ITGAV (Integrin alpha-V), MB (Myoglobin) e THBS2 (Thrombospondin-2) foram associadas ao estadiamento clínico do paciente, à presença de metástase linfonodal, à recorrência de metástase linfonodal e ao grau de diferenciação histomorfológica do tumor (p-valor<0,05, R<-0,7 ou 0,70,5). Dentre essas proteínas, a localização de COL6A1 e MB foram confirmadas por imunohistoquímica em um novo conjunto de amostras de CEC oral (n=96 casos) e as proteínas COL6A1 e ITGAV foram associadas as características infiltração capsular do linfonodo, margens livres e recorrência regional. Uma vez que a ocorrência de metástase linfonodal é o principal fator associado ao pior prognóstico de CEC oral, a presença dessas proteínas foi avaliada em amostras de saliva de pacientes com CEC oral com metástase linfonodal (n=10) e em pacientes sem metástase linfonodal (n=23). Por meio da análise proteômica baseada em alvos pelo método de monitoramento seletivo de reações (SRM) foi demonstrado que COL6A1 e ITGAV (Integrin alpha-V) estão menos abundantes em amostras de saliva de pacientes com metástase linfonodal, com capacidade de classificar pacientes com ausência e presença de metástase com alta sensibilidade (COL6A1: 0,739; ITGAV: 0.696) e especificidade (COL6A1: 0,9; ITGAV: 0,8). Portanto, este trabalho demonstra pela primeira vez por meio da combinação das técnicas de LMD e MS proteínas com distribuição espacial distinta entre as regiões de fronte invasivo e interior tumoral, presentes no estroma e também em saliva de pacientes com CEC oral, sendo capazes de distinguir entre pacientes com e sem metástase linfonodal, apresentando assim potencial valor prognóstico. Os presentes resultados indicam proteínas candidatas que podem ser associadas ao prognóstico para CEC de boca que podem guiar estratégias terapêuticas na prática clínica (AU)

• Processo FAPESP: 13/16483-0 - Estudo da composição de proteínas na área de invasão de carcinoma epidermóide por proteômica baseada em espectrometria de massas
• Beneficiário: Carolina Moretto Carnielli
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado