Desenvolvimento de sistemas de expressão heteróloga para Bacillus subtilis.

Autor(es)

Rafael Ciro Marques Cavalcante

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
• Data de defesa: 2013-12-13

Membros da banca

Luis Carlos de Souza Ferreira; Elizabeth Angelica Leme Martins; Eliane Namie Miyaji; Ana Clara Guerrini Schenberg; Carlos Eduardo Winter

• Orientador: Luis Carlos de Souza Ferreira

Resumo

Bacillus subtilis é uma alternativa ao emprego de Escherichia coli para a produção de proteínas recombinantes. O principal entrave à utilização de B.subtilis para esse fim é a baixa disponibilidade de sistemas de expressão. Nesse trabalho, testamos diferentes plasmídeos e promotores com o objetivo de desenvolver sistemas de expressão heteróloga eficientes. Ao fim do trabalho, propomos dois novos sistemas de expressão baseados do arcabouço do plasmídeo pMTL500E e nos promotores dos genes cdd e gsiB, ambos de B.subtilis. Os dois plasmídeos construídos apresentam expressão constitutiva e demonstraram desempenho superior no tocante à produção de proteínas heterólogas quando comparados ao único sistema comercialmente disponível, conhecido como pHT01. Em uma segunda parte do trabalho, propomos a utilização de Listeria innocua como veículo de entrega para antígenos vacinais. Por meio de ensaios ex-vivo e in vivo, demonstramos que essa bactéria possui potencial promissor para aplicações vacinais, inclusive quando comparada ao bem estabelecido B.subtilis. (AU)

• Processo FAPESP: 08/54194-2 - Construcao de sistemas de expressao para proteinas heterologas em cepas geneticamente modificada de bacillus subtilis.
• Beneficiário: Rafael Ciro Marques Cavalcante
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado