Superexpressão e silenciamento dos genes AHSP e Sara1 em células eritroides, análise por SAGE da expressão gênica em cultura eritroide estimulada por eritropoetina, identificação de genes em pacientes talassêmicos homozigotos para a mutação beta 39 (C-T) com evoluções clínicas distintas através de biblioteca subtrativa e estudo in vivo da mutação -195 do promotor de gama globina

Resumo

A elucidação dos mecanismos moleculares envolvidos nas fisiopatologias e tratamento de doenças hematológicas tem sido objeto de numerosas investigações. Os genes AHSP e Sarai a foram identificados utilizando a técnica de biblioteca subtrativa em células eritróides. Uma outra técnica que vêm sendo amplamente utilizada para o entendimento do perfil de expressão gênica em diversas células e tecidos é o SAGE. Com esta técnica é possível quantificar a expressão dos genes de um determinado tipo celular possibilitando inclusive a descoberta de novos genes. Devido ao conhecimento incompleto da regulação gênica em células da linhagem eritróide, propomos neste trabalho traçar o perfil de expressão gênica por SAGE em cultura eritróide de duas fases para identificação de genes estimulados pela adição de eritropoetina. Um outro propósito é a construção de biblioteca subtrativa para avaliação de genes relacionados a melhor evolução clínica em dois pacientes beta talassêmicos homozigotos para a mutação beta 39. (C-T) com evoluções clínicas distintas (maior e intermediária). Propomos também um aprofundamento no estudo dos genes Sara1a e AHSP através do silenciamento por RNA de interferência e superexpressão em cultura de células eritróides de duas fases além do estudo "in vivo" dos efeitos causados pela mutação - 195 do promotor da gama globina na expressão dos genes formadores da hemoglobina humana. (AU)