Efeito da insulina na ativacao de vias de sinalizacao mapk, erk e nf-kb e expressao de inos e cox2 em celulas pulmonares de ratos com inflacao pulmonar por lps ou alergica.

Resumo

A insulina regula o metabolismo celular modulando a atividade de proteínas envolvidas na sinalização intracelular. Entretanto, pouco se conhece sobre quais cascatas de sinalização a insulina age. Neste projeto pretende-se avaliar o papel da insulina nas vias de sinalização celular acionadas na vigência da inflamação pulmonar induzida por LPS e na inflamação alérgica pulmonar em ratos, enfocando as vias da MAPK, ERK e NF-kB. Para tanto será feita uma análise comparativa destas vias em homogenatos de pulmões ou em macrófagos isolados do BAL de ratos normais e diabéticos submetidos à inflamação por LPS ou alérgica e o efeito da reposição de insulina. Inicialmente será feita a extração diferencial de proteínas citoplasmáticas e nucleares no pulmão, utilizando o reagente NE-PER® (Pierce tecnology); seguida da determinação na fração de proteínas citoplasmáticas, das proteínas p38 (43 kDa), pERK1/2 (44/42 kDa) e plKB (41 kDa), e na fração de proteínas nucleares, das proteínas Phosp-p65-NF-kB (65 kDa) e total-p65-NF-kB (65 kDa) por Western Blot. A via do NF-kB está relacionada com a expressão das enzimas COX2 e iNOS responsáveis pela produção de moléculas inflamatórias e reguladores celulares importantes, como PGs e oxido nítrico. Assim, será avaliada também a expressão destas enzimas em macrófagos alveolares de ratos nas condições acima. (AU)