Glucoamilases mutantes termoestáveis do fungo Aspergillus awamori expressas em levedura Saccharomyces cerevisiae: seqüenciamento do gene, produção e purificação da enzima obtida por fermentação submersa

Resumo

A aplicação de enzimas como catalisadores em processos industriais, é hoje uma atividade bem estabelecida. Entretanto, um dos obstáculos que a aplicação desses biocatalisadores ainda enfrenta é a sua fácil desnaturação, quando submetidos à alta temperatura, valores extremos de pH ou a ação de proteases. O aumento da termoestabilidade enzimática poderia permitir que a reação fosse realizada em temperaturas elevadas, que além de contribuir para o aumento das taxas de conversão e solubilização do substrato, poderia ainda reduzir a possibilidade de contaminação microbiana. A glucoamilase é uma enzima de grande importância na produção de xarope de glicose a partir do amido. Neste processo, primeiramente o amido é dextrinizado pela ação da α-amilase bacteriana termoestável em temperatura próximas de 100°C, em seguida é sacarificado pela glucoamilase fungica em temperatura próxima a 55°C. Melhorar a termoestabilidade desta enzima seria fundamental para agilizar o processo e reduzir custos operacionais. Este tem sido o foco de muitas pesquisas nos últimos anos. Em estudo anterior foram produzidas, por meio de PCR mutagênico, glucoamilases mutantes de Aspergillus awamori expressas em Saccharomyces cerevisiae com uma elevada termoestabilidade. O presente projeto propõe a purificação das enzimas mutantes termoestáveis, bem como a caracterização bioquímica, físico-química e termodinâmicas das enzimas purificadas. Além disso, será feito o sequenciamento do gene das glucoamilases mutantes a fim de identificar a mutação responsável pelo aumento da termoestabilidade.