Melhoramento da termoestabilidade da glucoamilase de aspergillus awamori pela tecnica de pcr mutagenico, purificacao e caracterizacao da enzima.

Resumo

A glucoamilase é uma proteína altamente glicosilada que catalisa a liberação hidrolítica da D-glucose a partir da extremidade não redutora do amido e olìgossacarídeos relacionados. A estabilidade da glucoamilase cai rapidamente em torno do 60°C. Uma glucoamilase mais estável, que poderia ser usada a temperaturas mais elevadas, é industrialmente desejável. Neste projeto, faremos mutagênesis aleatórias no gene da glucoamilase selvagem do Aspergillus awamori usando a técnica de PCR mutagênico para gerar quimeras com mutações no gene selvagem. Clones com esta função melhorada terão seus DNAs novamente mutagenizados em novos rounds e re-selecionados num total de 2-3 ciclos até desenvolver quimeras de colônias de levedura que irão produzir enzimas glucoamilase mutantes com a sua termoestabilidade melhorada quando comparadas com a selvagem. A termoestabilidade das enzimas brutas serão avaliadas por testes de inativação térmica seguidos de pelo teste de formação de halos em placas de amido. Depois a enzima será purificada para determinação da constante de inativação térmica, também será caracterizada bioquimicamente para verificação de efeito da mutação nas propriedades cinéticas da enzima. (AU)