Produção de embriões bovinos transgênicos para o fator IX de coagulação

Resumo

Os fatores de coagulação sanguínea são necessários para manutenção da homeostase e a deficiência em qualquer fator conduz a desordem de sangramento. A deficiência dos fatores VIII (FVIII) e IX (FIX) são responsáveis pela hemofilia do tipo A e B, respectivamente, enquanto que a deficiência do fator VII (FVII) conduz a características semelhantes a hemofilia A. Estes tipos de deficiências hereditárias necessitam da administração de tais fatores para contenção dos episódios de sangramento. O uso de doses supra-fisológicas do fator FVII atua no tratamento de episódios de sangramento não controlados em pacientes que apresentam efeitos inibitórios para o FVIII e FIX, além de ser empregado em casos preventivos ou de hemorragia provenientes de traumas, ou ainda, em procedimentos cirúrgicos invasivos. Atualmente, a produção de tais fatores recombinantes, é realizada através de cultura de células, que apresenta alto custo e uma produção limitada para a demanda atual. A alternativa mais viável para suprir a demanda de tais fatores e diminuir o custo dos mesmos, é a obtenção de animais transgênicos capazes de produzirem estas proteínas no leite. O presente projeto propõe a obtenção de fragmentos de DNA, referentes à região promotora e dos elementos regulatórios distais do gene da b-caseína bovina. Clonar estes promotores no vetor pEGFP-N1 e avaliar a capacidade de expressão dos mesmos pela produção da proteína verde fluorescente (GFP), em células epiteliais de glândula mamária. Introduzir o promotor com melhor capacidade de expressão, no vetor pLXIN-FIX cedido pelo grupo de pesquisa do Hemocentro (USP - Ribeirão Preto), o qual já expressa o FIX. Transfectar células epiteliais de glândula mamária com o vetor de expressão construído e avaliar a expressão do FIX. Realizar a transferência nuclear de células de glândula mamária transgênicas em oócitos enucleados, e finalmente obter blastocistos transgênicos para o FIX.