Modulação da proteína transportadora de glicose glut4 pelo receptor canabinóide cb1 em adipócitos 3t3-l1 e tecido adiposo visceral de camungos obesos

Resumo

Na obesidade, o sistema endocanabinóide parece estar hiper ativado, resultando em aumento dos níveis de endocanabinóides tanto na circulação quanto no tecido adiposo visceral. O receptor canabinóide CB1 além de ser expresso no cérebro, é encontrado em tecido adiposo e músculo esquelético. Raros estudos in vitro sugerem que a ativação de CB1 resulte em aumento da captação de glicose em adipócitos. No entanto, nada se sabe a respeito do efeito dessa ativação sobre a expressão da proteína transportadora de glicose GLUT4 e nem dos possíveis fatores de transcrição envolvidos. Adicionalmente, não se conhece as ações de CB1 sobre os fatores NF-kB e SREBP em adipócitos. Dessa maneira, esse projeto tem como objetivo verificar a modulação da expressão de GLUT4, bem como o envolvimento dos fatores NF-kB e SREBP, pelo receptor canabinóide CB1 em cultura de adipócitos e camundongos obesos por glutamato monossódico (MSG). Para tanto, adipócitos da linhagem 3T3-L1 serão tratados por 24 e 48 horas com agonista seletivo do receptor CB1 (aracdonoil-2-cloro-etilamida), e/ou antagonista seletivo do receptor CB1 (AM251). Para estudo dos fatores de transcrição, as células serão previamente tratadas com inibidor de NF-kB (SN50), e/ou inibidor de SREBP (25-hidroxicolesterol). Paralelamente, camundongos controles e obesos serão tratados por 10, 20 ou 30 dias com antagonista seletivo CB1 (rimonabant) a fim de verificar o melhor tempo de tratamento para a melhora da resistência à insulina in vivo, que será avaliado por Teste de Tolerância à Insulina Intravenoso. Tanto em células como em tecido adiposo periepididimal de animais obesos tratados serão analisados: (1) expressão gênica de GLUT4, por Northern blotting, (2) expressão da proteína GLUT4, por Western blotting, (3) expressão gênica de SREBP-1c por RT-PCR semi-quantitativo e (4) ativação de NF-kB e SREBP-1c na região promotora do gene GLUT4, por Ensaio de Mobilidade Eletroforética (EMSA). Com esses estudos espera-se determinar o papel do receptor CB1 na regulação do GLUT4, e sua contribuição na resistência à insulina do tecido adiposo.