Clonagem, expressão e caracterização de proteínas de Escherichia coli enteropatogênica atípica (EPEC atípica) do sorotipo O55:H7

Resumo

RESUMOEscherichia coli enteropatogênica (EPEC) é atualmente subdividida em típica (EPECt) e atípica (EPECa), onde o plasmídio pEAF está presente somente no primeiro grupo. EPECt e EPECa pertencem a dois conjuntos diferentes de sorotipos. Em geral, linhagens de EPECt são mais homogêneas em suas características de virulência do que as atípicas. Com poucas exceções, linhagens de EPECt produzem somente os fatores de virulência codificados pela região LEE e pelo plasmídio EAF. Por outro lado, há dois tipos de linhagens EPECa: aquelas que expressam somente os fatores de virulência codificados pela região LEE e aquelas que expressam os fatores ligados ao LEE e os não codificados por LEE. Em um estudo recente realizado no Laboratório de Bacteriologia do Instituto Butantan comparando-se os isolados de EPECt do sorotipo O55:H6 e de EPECa do sorotipo O55:H7, por análise proteômica das proteínas de membrana (outer membrane proteins, OMPs) em gel de duas dimensões e análise das bandas protéicas obtidas através da técnica de peptide mass fingerprinting detectou-se uma maior expressão de proteínas em EPECa do que em EPECt e a presença de proteínas específicas de EPECa. Essas diferenças levaram-nos ao objetivo do presente projeto que consiste na caracterização das proteínas encontradas em EPECa por meio de clonagem, expressão, purificação e ensaios enzimáticos e biofísicos (Dicroísmo Circular, Fluorescência Intrínseca), prevalência da expressão destas proteínas em outros sorotipos de EPECa por immunoblotting após obtenção de anticorpos policlonais. Além disto, pretende-se também estudar o fato de EPECa apresentar uma maior expressão protéica do que EPECt, por meio de RT-PCR ou Northern Blot. (AU)