Expressão e caracterização bioquímica do rLosac, um ativador de fator X recombinante das cerdas da lagarta Lanomia obliqua: mecanismos celulares envolvidos na atividade proliferativa e antiapoptótica

Resumo

O Losac é o primeiro ativador de fator X (FX) purificado a partir das cerdas de um lepidóptero, ativando o FX da coagulação pela clivagem da ligação Arg52-Ile53 da cadeia pesada de forma similar ao RW-X. O mecanismo de reconhecimento e clivagem do FX pelo Losac ainda é desconhecido, no entanto nossos estudos sugerem uma provável atividade do tipo serinoprotease. A seqüência do Losac e a análise de estrutura por modelagem molecular revelaram similaridade com moléculas de adesão celular conhecidas pelo seu papel chave no desenvolvimento do sistema neurológico, tais como hemolinas de lepidópteros (47 a 76% de identidade), a neuroglian de D. melanogaster (34%) e L1-NCAM de humanos (26%). A função exata das hemolinas ainda é desconhecida. Provavelmente as propriedades adesivas das hemolinas estão associadas com o efeito do Losac observado em células endoteliais. Em 2006 publicamos um estudo demonstrando que o Losac nativo é capaz de induzir várias respostas em HUVECs tais como proliferação, inibição da apoptose e liberação de moléculas como oxido nítrico e t-PA. Nossa perspectiva é dar continuidade a este estudo utilizando a proteína recombinante e determinar possíveis pontos de ligação na membrana celular, ativação de vias de sinalização intracelular, expressão de moléculas do mecanismo apoptótico e da coagulação, domínios responsáveis pela atividade enzimática e celular e potencial terapêutico e biotecnológico. (AU)