Estudos funcionais sobre oligopeptídeos e oligopeptidases intracelulares e suas possíveis correlações fisiopatológicas

Resumo

Peptídeos gerados intracelularmente a partir de proteínas citosólicas, mitocondriais ou nucleares, muitos deles substratos, produtos ou inibidores competitivos de oligopeptidases como a thimet oligopeptidase (EP24.15; BERTI et al., 2009), podem exercer um papel importante na comunicação celular mediada por receptores acoplados a proteína G (GPCRs) (BEREZNIUK et al.; RIOLI et al., 2003; FERRO et al., 2004; HEIMANN et al., 2005; HEIMANN et al., 2007; CUNHA et al., 2008; BERTI et al., 2009; GOMES et al., 2009). Nesse projeto de pós-doutoramento, nosso objetivo é corroborar na caracterização funcional de oligopeptidases, como a EP24.15 e a neurolisina (EP24.16), investigando as implicações da alteração de suas atividades enzimáticas intracelular na transdução do sinal relacionado a GPCRs. Inicialmente, utilizando células HEK293 pretendemos inibir a expressão das oligopeptidases EP24.15 e/ou EP24.16 utilizando siRNA, e nessas condições analisar possíveis alterações na transdução de sinal disparado por agonistas/agonistas inversos de GPCRs como angiotensina II e hemopressinas. Possíveis alterações na transdução de sinal serão avaliadas por meio de ensaios com gene-reporter para luciferase, bem como por Western blot avaliando a ativação de proteínas chaves das vias de transdução de sinal, utilizando anticorpos comerciais específicos. Esses ensaios devem produzir informações importantes e originais sobre a participação das oligopeptidases no processo de transdução de sinal de GPCRs. (AU)