Caracterização ultraestrutural das células imunorreativas à 5-bromo-2deoxiuridina (BrdU) na zona ventricular e sub-ventricular adulta e de sua relação com o peptídeo regulador CART

Resumo

O maior nicho para a formação de novos neurônios no encéfalo adulto está ao redor dos ventrículos laterais. Neste local há um grupo de células com sua morfologia peculiar e derivadas de etapas específicas do processo de proliferação e diferenciação celular, que irão determinar a formação do neurônio. Porém, a descrição das células que iniciam a neurogênese nessa região ainda é controversa. Neste sentido, corroborar a caracterização ultra-estrutural das células, principalmente as que tenham entrado em ciclo de divisão, pode contribuir nesse debate. Ademais, a compartimentalização da região periventricular reflete um padrão de distribuição de fibras axonais, como as carreadoras do peptídeo neuroativo CART, cuja descrição de seu padrão de inervação e de suas relações com as células do nicho neurogênico, pode abrir perspectivas para o entendimento de um provável papel deste fator modulador biológico no nicho periventricular. Assim, propormos: 1) estudar a citoarquitetura em nível ultraestrutural das células imunorreativas (ir) ao BrdU localizadas na região periventricular; 2) colaborar para a compreensão da organização tridimensional in situ dessa região e 3) descrever a inervação por fibras axonais imunorreativas ao CART e supostas aposições estabelecidas com células próprias da região periventricular. Utilizamos ratos Long-Evans e camundongos C57Bl6 e GFAP:GFP, adultos. Os animais foram perfundidos com diferentes soluções fixadoras para posterior análise ultraestrutural da morfologia celular e neuroquímica na região periventricular do encéfalo, em microscópios eletrônicos de transmissão e varredura de alta-resolução, de luz e laser confocal. O estudo da proliferação na zona periventricular ocorreu a partir da administração de 2% arabinofuranosida (Ara-C) e do marcador de ciclo mitótico BrdU (50 mg/kg, i.p.). A investigação imunoistoquímica utilizou anticorpos primários anti-BrdU, anti-CART, anti-DCX, anti-GFAP e anti-GFP. As células da região periventricular foram ir-BrdU, em sua totalidade, embora com variação na densidade de marcação. Observamos que estas ocorridas no revestimento ventricular correspondem a células ependimárias, tanicitos e astrócitos. Essas células são heterogêneas quanto a densidade de distribuição ciliar, apresentando-se uni, bi ou multi-ciliadas, além de serem inervadas em sua superfície apical por axônios varicosos. Encontramos que a maior densidade de inervação por axônios ir-CART ocorre ao longo do trajeto migratório dos neurônios em formação e que esses axônios estabelecem aposições entre progenitores primários, neuroblastos e células que entraram em mitose. Portanto, 1) todas as células do nicho periventricular são ir-BrdU; 2) a organização tridimensional in situ do ventrículo lateral evidencia a heterogeneidade na densidade de implantação ciliar e uma densa inervação varicosa aposta aos diferentes cílios; 3) evidências anatômicas sugerem um papel do peptídeo regulador CART na neurogênese periventricular.