Descoberta e validação de pequenos RNAs preditivos de agressividade em câncer de mama

Resumo

O câncer de mama é a segunda causa de morte em mulheres no mundo. Infelizmente, os poucos marcadores moleculares usados na rotina diagnóstica ainda são insuficientes para permitir decisões clínico-cirúrgicas mais adequadas, e a heterogeneidade genética das pacientes e dos tumores limita a capacidade de predição da evolução clínica da doença. Deste modo, os estudos que buscam identificar marcadores de agressividade tumoral ainda estão entre os mais relevantes na pesquisa oncológica atual. Neste projeto investigaremos o possível papel de pequenos RNAs - incluindo microRNAs (miRNAs), small nuclear RNAs (snRNAs) e small nucleolar RNAs (snoRNAS) - como marcadores de agressividade tumoral em câncer de mama. Para isto, estes pequenos RNAs serão extraídos de amostras de tumores obtidos de 50 mulheres com câncer de mama ductal invasivo (Her2+, PR- e ER-), separadas em dois grupos polares de agressividade, devidamente pareadas por idade, tipo tumoral, status linfonodal e expressão de citoqueratinas. Bibliotecas serão construídas com estes pequenos RNAs - com a adição de tags que permitam a identificação de origem da amostra - e sequenciadas em larga-escala na plataforma SOLiD 4.0. As sequências obtidas serão mapeadas e analisadas quantitativa e qualitativamente, de modo a permitir inferir a expressão de cada uma das espécies de pequenos RNAs encontradas nestes tumores. Os pequenos RNAs com maior e mais consistente expressão diferencial serão confirmados por PCR em tempo real (qPCR), seguidas de validação em um painel de linhagens de celulares de câncer de mama com características distintas de migração, invasão e formação de metástases. Deste modo, esperamos contribuir com a descoberta de novas moléculas de pequenos RNAs e novos potenciais marcadores de agressividade em câncer de mama. (AU)