Determinação da especificidade de peptidases isoladas de fungos usando peptídeos FRET como substratos

Resumo

As peptidases podem ser obtidas a partir de bactérias, fungos, leveduras, tecidos de animais e plantas. Apesar da ampla fonte de obtenção, as peptidases microbianas desempenham um papel específico de catalisador na hidrólise de proteínas e peptídeos. Certamente é um dos grupos mais importantes de enzimas industriais responsáveis por cerca de 60% do total das vendas de enzima em todo o mundo. Apresentam aplicações nas diversas áreas, incluindo indústria farmacêutica, cosmético, alimento, papel, processamento de couro, preparação de fertilizante orgânico e componente de detergente. Os fungos filamentosos são amplamente explorados, devido à sua capacidade de crescer em grandes massas de materiais vegetais, pilhas de produtos agroindustriais e outros acúmulos de matérias orgânicas, onde o ambiente quente, úmido e aeróbio fornece as condições básicas para seu desenvolvimento e produção de uma vasta gama de produtos de interesse econômico, entre estes produtos podemos destacar as enzimas extracelulares, dentre estas as peptidases. A habilidade das peptidases em discernir dois ou mais substratos que competem entre si, é função das características físico-químicas dos subsítios desta subclasse de enzima e também dos substratos que interagem com ela. A determinação da especificidade é o primeiro passo quando se quer caracterizar novas peptidases. Substratos peptídicos com supressão intramolecular de fluorescência compreende a classe mais versátil de substratos sintéticos para peptidase disponível atualmente. Esta classe de substrato é útil para ampla aplicação na enzimologia, devido sua simplicidade, rapidez e precisão na determinação das constantes reacionais. O interesse científico em peptidases e suas ações em diferentes proteínas não somente podem resultar em melhores produtos, mas também estimular o desenvolvimento de um grande número de novas aplicações na produção de fármacos, de alimentos e seus ingredientes e em peptídeos que apresentam atividades biológicas. O presente projeto tem como objetivo realizar a produção de peptidases de origem fúngica por fermentação sólida, a purificação das peptidases, a determinação das características bioquímica funcional e estrutural e a determinação da especificidade das peptidases utilizando os substratos peptídicos com supressão intramolecular de fluorescência. Por se tratar de um projeto envolvendo a produção, purificação e caracterização de novas enzimas que possuem amplas aplicações em diversas áreas, este projeto apresenta grande potencial de novos pedidos de patentes, além dos artigos científicos que serão produzidos com os resultados obtidos. (AU)