Regulação transcricional do gene dnmt1 pelo estresse oxidativo causado pelo bloqueio de ancoragem de melanócitos

Resumo

Apesar de o melanoma representar apenas 4% dos tipos de câncer de pele, apresenta alta letalidade, principalmente nos casos avançados em que há falta de tratamentos eficientes. Assim como em outras neoplasias, a predisposição genética, a exposição a fatores ambientais e as alterações epigenéticas podem contribuir para seu desenvolvimento. Um dos principais mecanismos epigenéticos conhecidos em eucariotos é a metilação do DNA, que atua nas células normais promovendo silenciamento da expressão de determinados genes e mantendo a estabilidade do genoma. Modificações nos padrões de metilação do DNA encontrados nas células normais podem levar à formação de células neoplásicas e neste processo há a participação de um grupo de enzimas conhecidas como DNA metiltransferases (Dnmts). Diferentes linhagens de melanoma foram estabelecidas por nosso grupo após submeter a linhagem de melanócitos murinos melan-a a ciclos sequenciais de bloqueio de ancoragem. Nosso gupo já mostrou que há aumento nos níveis de metilação global e expressão da Dnmt1 durante o bloqueio de adesão imposto à melan-a. Adicionalmente, mostramos que esse aumento parece estar relacionado com o aumento de ânion superóxido que também ocorre durante o bloqueio de adesão. Além disso, o tratamento com inibidor de Ras ou com inibidor de erk durante o bloqueio de adesão promoveu diminuição dos níveis de ânion superóxido e também da expressão da Dnmt1. Estes dados sugerem que a via Ras/Mek/Erk parece regular e ser regulada pela produção de O2- e sua ativação pode ser responsável pelos altos níveis de Dnmt1 e pela hipermetilção de DNA global observadas durante a perda de adesão. Desta meaneira, este trabalho tem como objetivo desvendar as vias pelas quais o O2-modifica a transcrição gênica de dnmt1 durante a condição de bloqueio de ancoragem. Para tanto, avaliaremos quais fatores de transcrição interagem com dnmt1 in vivo e quais são importantes para a atividade transcricional do seu promotor. Avaliaremos também quais vias são inibidas quando há depleção de O2- ou quando há inibição de Ras. Nossos resultados poderão ser de grande importância na elucidação dos mecanismos moleculares envolvidos nos primeiros passos da progressão do melanoma, podendo prover dados de futura utilidade no desenvolvimento de drogas que atuem diretamente na via em estudo.