Contribuição do estresse oxidativo e enzimas NADPH oxidases (NOXes) para as lesões vasculares associadas ao diabetes: estudo em camundongos nocautes

Resumo

O diabetes mellitus representa uma das mais importantes doenças crônicas não transmissíveis. O estresse oxidativo gerado pela hiperglicemia tem papel importante no aumento do risco das complicações do diabetes, as quais incluem lesões vasculares. Como a enzima NADPH oxidase (NOX) representa elemento central nas disfunções vasculares associadas ao diabetes, a presente proposta pretende determinar o papel de isoformas específicas de NOX (NOX1 e NOX4), bem como das subunidades p47phox e NOXO1, no desenvolvimento das complicações vasculares do diabetes. Nossa hipótese é que isoformas específicas de NOX estão diferencialmente e positivamente reguladas no tecido vascular (NOX1) de animais diabéticos, contribuindo assim para as disfunções associadas a esta patologia. Se nossa hipótese estiver correta estas isoformas de NOX representarão alvos ideais para geração de drogas que visam a redução das complicações do diabetes. Nosso objetivo, portanto, é determinar o papel das ROS geradas pelas NOX1 e NOX4 na vasculopatia associada ao diabetes e avaliar se esta é decorrente da expressão diferencial da subunidade p47phox. Para isso serão utilizados dois enfoques experimentais:1) camundongos db/db (C57BLKS/JLepr), considerado modelo de nefropatia diabética, serão cruzados com camundongos knockout para NOX1 (NOX1-/-), NOX 4 (NOX4-/-) e p47phox-/-, e as alterações vasculares serão caracterizadas. 2) artérias mesentéricas serão isoladas de camundongos diabéticos e controle. Culturas de células vasculares (muscular lisa) destes animais serão utilizadas para determinar as vias moleculares que participam da geração de ROS mediada pelas NOXes 1 e 4, assim como as vias dependentes das NOXes para proliferação e ativação de marcadores inflamatórios.Obs.: Este projeto de Doutorado é parte integrante de um projeto de cooperação bilateral recentemente aprovado pela FAPESP (chamada de Projetos de Pesquisa FAPESPAUF Proc. 2010/522146) e, neste sentido, é desenvolvido em colaboração com o grupo da Dra. Rhian M Touyz da Universidade de Ottawa. Como previsto no plano inicial do projeto FAPESPAUF e no projeto de Doutorado do Thiago, um dos objetivos [caracterizar as alterações vasculares em camundongos db/db (C57BLKS/JLepr) cruzados com camundongos knockout para NOX1 (NOX1/), NOX 4 (NOX4/) e p47phox (p47phox/)] deverá ser desenvolvido na Universidade de Ottawa, uma vez que as colônias de camundongos NOX1/, p47phox/ e NOX4/ encontramse disponíveis no laboratório da Profa Rhian. O estágio permitirá a caracterização fenotípica destes animais (glicemia/insulina, pressão arterial, função renal), estudos de reatividade vascular e em cultura de células primárias de músculo liso vascular (artéria mesentérica) de camundongos transgênicos e controles. (AU)