Identificação de proteínas de Trypanosoma cruzi modificadas por S-nitrosilação e nitração após adesão com matriz extracelular.

Resumo

NO é um sinalizador químico sintetizado enzimaticamente a partir de L-Arginina em diversos tipos celulares e em diferentes organismos. Sua atuação se dá principalmente através de três vias: interação com centros metálicos de proteínas modulando sua atividade, ativação da enzima guanilato ciclase com subseqüente produção de cGMP, e alteração covalente de polipeptídeos por S-nitrosilação em cisteína ou nitração em tirosina. Tais alterações covalentes são de grande interesse, uma vez que estão associadas com diversos processos fisiológicos e fisiopatológicos, em diversos animais e vegetais. Embora o tema seja controverso na literatura, as modificações de proteínas mencionadas estão sendo associadas com sinalização intracelular.A matriz extracelular (ECM) nos tecidos participa de diversos processos fisiológicos, como comunicação intercelular. Trypanosoma cruzi interage com componentes da ECM, desencadeando respostas tanto na célula hospedeira (modulação da expressão gênica, por exemplo), como no próprio parasita. Apesar de sua importância, o conhecimento das respostas desencadeadas no parasita pela interação com ECM é incipiente. Embora a existência de NO sintase e formação de cGMP já são conhecidas, a modificação de proteínas por S-nitrosilação e nitração foram muito pouco abordadas.Uma vez que dados preliminares do laboratório apontam para modificações por S-nitrosilação e nitração em proteínas do parasita incubado com ECM, no presente projeto propõe-se a identificação por MS/MS de proteínas alteradas por S-nitrosilação e nitração como consequência da adesão do parasita com a matriz extracelular. O papel de NO sintase no processo será verificado pela utilização de inibidores da enzima e dosagem de NO na interação do parasita com a ECM.