Papel dos segundos mensageiros nas vias de sinalização envolvidas na interação de Trypanosoma cruzi e matriz extracelular

Resumo

Modificações pós-traducionais por fosforilação e S-nitrosilação, foram detectadas por análise proteômica em várias enzimas chave de processos de sinalização celular no parasita, quando este entra em contato com ECM. Algumas destas proteínas estariam participando em processos de sinalização mediados por cAMP, cGMP e cálcio, tais como a cAMP fosfodiesterase (PDE) e a calmodulina. Este projeto tem como objetivo validar os dados obtidos pela análise proteômica e estudar se há uma relação entre a presença ou ausência de cálcio e a aparição de algumas destas modificações ao contato com ECM. As mudanças no perfil de movimentação de cálcio serão monitoradas usando o fluorôforo Fluo-4, na presença de ECM e de BAPTA/AM (um quelante de cálcio). A sinalização desencadeada será acompanhada pela quantificação do cAMP e cGMP produzidos nas diferentes condições. Faremos comparações entre as mudanças nos perfis de modificações por fosforilação e S-nitrosilação entre os parasitas incubados com ECM e BAPTA/AM, verificando se estas modificações estão presentes ou ausentes em proteínas de interesse de algumas vias de sinalização relacionadas tais como PKA e MAPK, as quais poderão ser verificadas com anticorpos específicos para fosforilação, ou imuno-precipitadas e analisadas para S-nitrosilação e fosforilação. As atividades enzimáticas da nitrato sintase uma enzima envolvida na produção de oxido nítrico no parasita e da PDE, uma enzima regulatória dos níveis intracelulares de cAMP, serão avaliadas a partir de extratos totais de parasitas previamente incubados com ECM. Pretende-se com este projeto ampliar o conhecimento sob os processos de sinalização que ocorrem entre as formas tripomastigotas e a ECM, interação determinante para a internalização do T. cruzi nas células. (AU)