Papel da insulina na vigência da inflamação alérgica pulmonar em camundongos diabéticos e sadios

Resumo

Em trabalho anterior observamos que alterações inflamatórias no pulmão, desencadeadas na reação alérgica (fase inicial - seis horas após um único desafio), tais como, infiltrado celular, produção de citocinas (TNF-alpha, IL-1beta e IL-10) e moléculas de adesão encontravam-se reduzidas em ratos diabéticos. O tratamento destes animais com dose única de insulina, corrigiu estas alterações. No entanto, a asma é uma doença complexa que envolve, simultaneamente, a participação de várias células, citocinas e mediadores inflamatórios em que a fase inicial é completamente diferente da fase tardia. O modelo de asma proposto neste projeto se baseia em protocolo de imunização já descrito na literatura (HOGAN et al., 1997) que utiliza uma dose reforço do antígeno sete dias após a primeira imunização e submete os animais a dois desafios antigênicos também intercalados por sete dias. Este modelo (fase tardia), caracteriza-se por um padrão específico de inflamação na mucosa das vias aéreas, envolvendo eosinófilos e linfócitos com predomínio da sub-população Th2. Além disso, podem ocorrer mudanças estruturais nas vias aéreas (remodelamento) que incluem aumento da deposição de colágeno ao redor dos brônquios, fibrose sub-epitelial, hipertrofia e hiperplasia do músculo liso das vias aéreas, angiogênese e aumento de secreção de muco. Assim, neste novo projeto pretende-se avaliar o papel da insulina na vigência da fase tardia da inflamação alérgica pulmonar em camundongos diabéticos e sadios. Para tanto será feita a seguinte análise: a) o número de células no lavado broncoalveolar (LAB), o leucograma e a glicemia (monitor de glicose); b) as concentrações de citocinas (IL1b, TNF-a, IL-6, IL-4, IL-10, VEGF, TGF-b) no sobrenadante do LAB pela técnica de ELISA; c) infiltrado linfocitário (CD4+, CD8+, Tgd e NK1.1) no LAB por citometria de fluxo (FACS); d) deposição de colágeno no tecido pulmonar através de análise morfométrica em cortes histológicos corados com Picrosirius; e) quantificação da presença de muco nos brônquios através de análise morfométrica em cortes histológicos corados com ácido periódico de Schiff e alcian blue (AB-PAS).