Investigando o papel da insulina na vigência da inflamação alérgica pulmonar em camundongos diabéticos e sadios

Resumo

Asma é uma doença complexa que envolve, simultaneamente, inúmeras células, citocinas e mediadores inflamatórios onde a fase inicial é completamente diferente da fase tardia. Em estudo recente observamos, utilizando modelo experimental desenvolvido em camundongos pré- imunizados com ovalbumina (OVA), que a insulina interfere na produção/liberação de citocinas, migração celular, deposição de colágeno e secreção de muco envolvidos na remodelação pulmonar. O modelo de asma proposto neste projeto utiliza uma dose reforço do antígeno doze dias após a primeira imunização e submete os animais a sete desafios antigênicos subsequentes com OVA. Este modelo, caracteriza-se por um padrão específico de inflamação na mucosa das vias aéreas, envolvendo eosinófilos e linfócitos com predomínio da sub-população T helper (Th)2. Além disso, são observadas mudanças estruturais nas vias aéreas (remodelamento), tais como aumento da deposição de colágeno ao redor dos brônquios, fibrose sub-epitelial, hipertrofia e hiperplasia do músculo liso das vias aéreas, angiogênese e aumento de secreção de muco. Com este auxílio pretende-se complementar este estudo, avaliando o papel modulatório da insulina sobre a inflamação alérgica pulmonar tardia. Para tanto, o estudo realizado em camundongos sadios, será reproduzido em camundongos tornados diabéticos. Serão avaliados: a) glicemia (monitor de glicose), b) responsividade das vias aéreas antes e após prova de broncoprovocação por metilcolina (buxco), bem como prova de função pulmonar in vivo (flexiVent) c) estudo das células presentes no lavado broncoalveolar (LBA), e análise das subpopulações celulares por citometria de fluxo em amostras da medula óssea, pulmão, timo e baço; d) determinação dos níveis séricos de: insulina, corticosterona e imunoglobulinas (IgE, IgG1 e IgG2a) por ELISA; e) níveis de concentração de citocinas (IL-4, IL-5, IL-10, IL-13, TNF-± e IFN-³ ) em amostras de sobrenadante do LBA por ELISA; f) expressão das moléculas envolvidas na sinalização celular (p38 MAPK, colágeno I, Smad 2, e Smad 3) em pulmão e em medula óssea, pela técnica de Western blot; g) alterações de expressão do RNA mensageiro nas vias de sinalização intracelular durante o curso da inflamação pulmonar de origem alérgica pela técnica de RT-PCR. (AU)