Tráfego mitocondrial e autofagocitose em neurônios dopaminérgicos humanos derivados de células-tronco embrionárias e de pluripotência induzida

Resumo

A perda dos neurônios dopaminérgicos e a presença de agregados proteicos contendo alfa sinucleína são as principais características celulares da doença de Parkinson. No entanto, alterações celulares estão presentes antes o aparecimentos desses agregados o que pode contribuir para o desencadeamento da morte celular. As células-tronco oferecem amplas possibilidades de modelos para estudo de doenças neurodegenerativas. As de pluripotência induzida ainda permitem a investigação das funções celulares em indivíduos acometidos por doenças neurodegenerativas. Com isso, os objetivos do presente trabalho são: implementar a técnica de derivação de neurônios dopaminérgicos a partir de células-tronco embrionárias e de fibroblastos com pluripotência induzida; estudar a influência do cálcio nos primeiros estágios da neurodegeneração, bem como analisar o tráfego de mitocôndrias e do sistema de autofagia nestes neurônios na ausência e presença de agregados contendo alfa-sinucleína. Para tanto, serão feitas culturas de células-tronco embrionárias humanas da linhagem BR-1 e de fibroblastos de pacientes diagnosticados com doença de Parkinson idiopática os quais serão induzidos à pluripotência pela expressão de SOX2, c-MYC, OCT4 e KFL4. As células tronco serão então diferenciadas em neurônios dopaminérgicos e avaliados usando Fura-2, expressão de alfa-sinucleína e proteína miro mutante, assim como ativação e repressão do sistema de autofagocitose a fim de compreender alguns eventos importantes nos estágios iniciais da neurodegeneração dopaminérgica. (AU)