Análise da expressão de genes polimórficos identificados em portadores de carcinoma de células escamosas de base de língua

Resumo

Alterações genéticas herdadas, como polimorfismos gênicos de base única (SNPs), foram associadas com o risco de carcinoma de células escamosas (CEC) de cabeça e pescoço. O CEC de base de língua (BL) merece destaque entre os demais devido às altas taxas de morbidade e mortalidade, mas a associação desse tumor com SNPs não foi ainda estabelecida. Recentemente, nós identificamos 6.609 novos SNPs associados com alterações no risco de ocorrência do CEC de BL. O estudo foi conduzido por genotipagem em larga escala em amostras de sangue periférico de pacientes com CEC de BL e controles saudáveis, utilizando microarranjos de DNA (SNP array 5.0, Affytmetrix®). Vários SNPs considerados de interesse estiveram localizados na região codificadora dos genes SPTA1 (rs863931), TREML2 (rs3747742), ZAN (rs17147735), IKBKAP (rs3204145), FAM24B (rs1891110), CASP5 (rs3181320), EXOC3L4 (rs2297067), LGALS14 (rs4830) e CPT1B (rs2269383). Uma vez que as quantidades e funções das proteínas codificadas pelos alelos selvagens e variantes dos SNPs não foram ainda determinadas, não nos foi possível esclarecer as associações identificadas. Frente ao exposto, o nosso objetivo no presente estudo é o de avaliar se os diferentes genótipos (homozigoto selvagem, heterozigoto, homozigoto variante) dos referidos SNPs alteram as expressões dos respectivos genes. Para cumprir tal objetivo, optamos por analisar amostras de sangue periférico de indivíduos saudáveis. O DNA genômico das amostras será analisado para identificar os genótipos de cada polimorfismo (homozigoto selvagem, heterozigoto, homozigoto variante), por meio da reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR), utilizando iniciadores e sondas TaqMan® (Applied Biosystems®). O RNA total das amostras será analisado para a identificar a expressão gênica em indivíduos com os distintos genótipos de cada SNP, por meio da reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR), utilizando iniciadores específicos e o corante SYBR Green (Applied Biosystems®). A significância estatística das diferenças de expressão gênica (””CT) entre grupos (homozigoto selvagem, heterozigoto, homozigoto variante) será avaliada por meio dos testes t e ANOVA, considerando um valor de P< 0,05. Acreditamos que os resultados deste estudo poderão contribuir para definir os papéis dos alelos selvagem e variante de cada SNP na produção das respectivas proteínas e, consequentemente, definir seus papéis na predisposição herdada ao CEC de BL. (AU)