Influência da 5-Hidroximetilcitosina na Reprogramação Nuclear de Bovinos

Resumo

A reprogramação nuclear de uma célula somática a um estado embrionário tem diversas aplicações, como pesquisas básicas na biologia do desenvolvimento, aplicações médicas em terapia celular, melhoramento genético na agropecuária e conservação de espécies. As principais técnicas utilizadas na reprogramação nuclear são a transferência nuclear de células somáticas (TNCS) e a geração de células tronco induzidas (iPS). Muitos trabalhos tem mostrado uma baixa eficiência no processo de reprogramação nuclear nas duas técnicas, além disso, modificações epigenéticas tem sido apontadas como a principal barreira para uma reprogramação nuclear eficiente. As principais modificações epigenéticas são a metilação do DNA e modificações da proteína histona, como acetilação e metilação. Recentemente, a descoberta de mais uma modificação epigenética, a 5-hidroximetilcitosina (5hmC), relacionada ao mecanismo ativo de desmetilação do DNA, oferece uma nova abordagem no entendimento dos mecanismos envolvidos na reprogramação nuclear. Por isso, o objetivo deste trabalho é investigar a influência da 5hmC na reprogramação nuclear de bovinos, bem como utilizar novas estratégias para aumentar a eficiência das principais técnicas de reprogramação. Para isso, analisaremos o perfil epigenético (5mC, 5hmC, H3K9ac e H3K9me2) de células com diferentes níveis de diferenciação celular e as utilizaremos como doadoras de núcleo na TNCS. Além disso, visando facilitar o mecanismo de oxidação do DNA por meio da 5hmC, trataremos linhagens celulares com um agente modificador da cromatina (BIX-01294) para utilizá-las como doadoras de núcleo na TNCS e iPS. O perfil epigenético dos zigotos e das células geradas será analisado quanto a influência do tratamento nos principais marcadores. Assim, esperamos estabelecer a relação entre os níveis de 5hmC nas células doadoras de núcleo ao grau de eficiência da desmetilação do DNA durante a reprogramação nuclear.