Biofilmes polimicrobianos: estudo, caracterização, avaliação da patogenicidade em Galleria mellonella, e influência na expressão de genes de virulência de C. albicans.

Resumo

Apesar do crescente aumento de pesquisas com biofilmes, pouco se sabe sobre o comportamento de comunidades microbianas mistas, particularmente em interações entre fungos e bactérias. Para a compreensão das doenças infecciosas e desenvolvimento de novos medicamentos e estratégicas terapêuticas, torna-se necessário estudos in vitro e in vivo de modelos de biofilmes polimicrobianos. O objetivo desse estudo será caracterizar os biofilmes polimicrobianos, in vitro, formados por Candida albicans, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Pseudomonas aeruginosa; avaliar a patogenicidade da interação entre esses micro-organismos no modelo experimental de invertebrado Galleria mellonella e na expressão de genes de virulência de C. albicans. O presente projeto será dividido em cinco etapas. Na etapa A, os biofilmes polimicrobianos serão estudados e caracterizados através dos seguintes testes: quantificação de células viáveis e células desprendidas do biofilme, atividade metabólica pelo ensaio colorimétrico com XTT; análise da biomassa (peso seco); e, ensaio de bactérias aderidas a hifas. Na etapa B, os biofilmes serão analisados microscopicamente através de microscopia eletrônica de varredura e microscopia confocal de varredura a laser. A ação da enzima liticase na integridade dos biofilmes polimicrobianos será realizada na etapa C do projeto. Estudos in vivo da patogenicidade microbiana no modelo experimental de G. mellonella serão realizados na etapa D, através da curva de sobrevivência desta larva e quantificação dos micro-organismos. A influência dos biofilmes polimicrobianos na expressão de genes de virulência de C. albicans será avaliada na etapa E. A análise estatística dos resultados obtidos no presente estudo será realizada com auxílio do software Minitab, considerando diferença estatisticamente significante quando o valor de p for menor que 0.05.