Estudo da resistência heterogênea à vancomicina em Staphylococcus aureus através da genética comparativa de subpopulações de um isolado

Resumo

A vancomicina é frequentemente a única alternativa contra infecções por S. aureus resistente a meticilina (MRSA). Cepas MRSA que não respondem ao tratamento com vancomicina são caracterizadas como resistentes (VRSA) ou intermediárias (VISA). Cepas com fenótipo VISA apresentam engrossamento da parede celular, o que pode ocorrer por conjuntos diferentes de mutações em vários genes. Ademais, certas linhagens apresentam o fenômeno de resistência heterogênea à vancomicina (hVISA), em subpopulações de uma única colônia apresentam concentrações inibitórias mínimas (CIMs) de vancomicina maiores que a mediana populacional total, o que pode levat a um resultado falso sensível no laboratório clínico. Essas subpopulações com CIMs maiores do que a maioria que não seriam detectadas por sequenciamento a partir de DNA extraído de uma massa de células obtidas por cultivo, já que genes não mutados dominariam a amostra. A presente proposta pretende usar uma abordagem de célula única (single cell) para identificar quais dos genes mutantes atribuídos ao fenótipo VISA encontram-se já presentes em todas as subpopulações de linhagens hVISA, e quais estão presentes em apenas algumas. Os genomas das células únicas hVISA isoladas por microdissecção a laser serão amplificados por MDA e sequenciados. O mesmo será feito com células de linhagens com fenótipo VISA e sensíveis à vancomicina (VSSA). O alinhamento dos scaffolds genômicos permitirá identificar polimorfismos nas sequências codificadoras entre subpopulações de cada linhagem hVISA, bem como entre essas e células de linhagens VISA e VSSA.