Identificação de epítopos presentes na proteína e do vírus dengue tipo 2 (DENV2) capazes de gerar anticorpos neutralizantes sem promover a exacerbação da replicação viral

Resumo

A dengue, doença causada por um dos quatro sorotipos de vírus da dengue (DENV 1-4), é a principal arbovirose que atualmente atinge seres humanos. Embora cerca de 390 milhões de pessoas sejam infectadas anualmente por um dos tipos de DENV, ainda não existem vacinas nem terapias que controlem a doença. Uma das principais dificuldades para o desenvolvimento de uma vacina é a falta de conhecimento sobre os principais epítopos alvo para anticorpos neutralizantes na partícula viral. Acreditava-se que o domínio III da glicoproteína de envelope (EDIII) do DENV concentrasse os principais alvos para anticorpos neutralizantes, mas resultados gerados durante o mestrado da estudante revelaram uma realidade diferente. Anticorpos anti-EDIII homotípicos, embora capazes de impedir a infecção de células desprovidas de receptores do tipo Fc-³ pelo DENV2, direcionam partículas virais para células que expressam esses receptores promovendo o aumento da replicação do vírus tanto em condições in vitro como in vivo. Por outro lado, foi possível demonstrar que anticorpos capazes de proteger células que expressam receptores Fc-³ são dirigidos contra outros domínios, epítopos lineares e conformacionais presentes na superfície da partícula viral. O objetivo do presente projeto é, portanto, identificar e mapear epítopos-alvo, sejam eles lineares ou conformacionais, para anticorpos neutralizantes que não promovam o aumento da replicação viral, sobretudo, durante o processo infeccioso in vivo. Epítopos lineares serão identificados por ensaios de ELISA contra peptídeos derivados de diferentes domínios da proteína E enquanto epítopos conformacionais serão identificados por microscopia crio-eletrônica. Antígenos recombinantes serão gerados a partir dos resultados obtidos e testados in vivo em modelo experimental baseado em um isolado de DENV2 capaz de infectar e matar camundongos imunocompetentes. O conhecimento gerado a partir desta pesquisa deverá permitir que abordagens mais racionais sejam aplicadas ao desenvolvimento de vacinas contra a dengue. (AU)