Implantação de um modelo in vitro de avaliação da permeabilidade vascular para estudos da patogênese da dengue hemorrágica e triagem de compostos com potencial terapêutico

Resumo

A hemorragia é um dos principais sinais de complicação da infecção pelo vírus da dengue (DENV), caracterizando a dengue hemorrágica (DH), uma forma grave da doença com potencial letal especialmente em crianças. A patogênese da DH é complexa e multifatorial, envolvendo fatores virais e do hospedeiro. Além disso, a escassez de modelos animais que representem satisfatoriamente a fisiopatologia da dengue em humanos limita os avanços no entendimento dos mecanismos da DH e dificulta o desenvolvimento de fármacos para o tratamento da dengue. Os monócitos compõem o conjunto de células responsáveis pela resposta imune à infecção pelo DENV, produzindo mediadores que interagem com o endotélio aumentando o extravasamento vascular em humanos. Sendo assim, este projeto visa a implantação de um modelo de avaliação da permeabilidade vascular in vitro num sistema de cocultura de células endoteliais e monócitos infectados pelo DENV para estudar fatores envolvidos no extravasamento vascular e possíveis fármacos que possam inibir este processo. As células endoteliais serão cultivadas sobre insertos de membranas microporosas dispostos em placas de cultura gerando dois compartimentos, apical e basolateral. Neste sistema, as células infectadas pelo DENV produzirão citocinas e mediadores que irão interferir com a permeabilidade vascular in vitro, semelhantemente ao que ocorre in vivo. Através da adição de dextrana fluorescente no lado apical e medição da sua transferência para o lado basolateral a permeabilidade vascular será calculada. Desta maneira, será possível fazer a triagem de compostos com potencial terapêutico na dengue, estudar a interferência na permeabilidade vascular por diferentes isolados clínicos do DENV e avaliar o perfil de produção de citocinas em reposta a infecção para melhor entender os fatores que interferem na patogenia da DH. (AU)