Caracterização de mutações adaptativas no vírus da dengue sorotipo 2 (DENV2) cultivados em diferentes sistemas, através de sequenciamento em larga escala

Resumo

O acúmulo de mutações em arbovírus, incluindo dengue, não ocorre tão rapidamente como nos demais vírus de RNA, como HCV e HIV. Provavelmente, a forte seleção resultante da alternância de hospedeiros, aliada a uma possível maior fidelidade da RNA polimerase viral mantenham a estabilidade genética observada nos arbovírus. Para ser efetivamente transmitido entre hospedeiros de classes tão diferentes, o fitness (capacidade replicativa) de um arbovírus deve ser semelhante em ambos, o que de certa forma acaba limitando o nível de adaptação dos vírus a apenas um tipo de hospedeiro. Portanto, a alternância de hospedeiros gera vírus generalistas, onde as substituições neutras ou favoráveis para replicação em ambos os hospedeiros seriam mais facilmente selecionadas (trade-off hypothesis). Além de seleção natural impactando no ganho de variabilidade, os vírus ainda podem perder variabilidade por deriva genética. Por outro lado, já foi demonstrado que certos arbovírus foram capazes de infectar novos hospedeiros, aumentar sua capacidade replicativa ou ainda, aumentaram sua virulência no hospedeiro vertebrado com a substituição de apenas um aminoácido. Ainda assim, pouco se sabe a respeito dos mecanismos que governam o ganho/perda desse fitness e patogenicidade em condições naturais. Para isso, modelos que mimetizem a replicação viral em diferentes condições e micro-ambientes podem auxiliar na compreensão da evolução desses vírus e na elucidação dos mecanismos imunopatogênicos da infecção por esses agentes. Assim pretende-se obter nessa proposta uma maior compreensão dos mecanismos de aquisição de substituições de caráter adaptativo em vírus crescidos em células de inseto e células de mamífero, e também em insetos vetores fêmeas Aedes aegipty. O genoma completo dos vírus presentes em diferentes tecidos do mosquito (intestino médio e glândula salivar) e em cultura celular serão obtidos através de sequenciamento em larga escala, o que permitirá uma análise profunda e detalhada da população viral. Uma vez que nosso grupo já gerou dados semelhantes aos propostos aqui, porem a partir de hospedeiro vertebrado, os resultados obtidos nesse estudo poderão ser analisados de forma abrangente e comparativa. Dessa forma, esses resultados contribuirão para o entendimento do impacto da pressão seletiva exercida por cada hospedeiro no fitness viral, e consequentemente, na evolução desses vírus a curto e a médio prazo. (AU)