Estudos funcionais da tirosina quinase Fibroblast Growth Factor receptor (FGFR2), da adaptadora growth factor Receptor- bound protein 2 (GRB2) e da tirosina fosfatase SHP2

Resumo

O metabolismo celular é mediado por vias de sinalização que são reguladas por atividades enzimáticas dependentes da fosforilação reversível da cadeia lateral de aminoácidos. Deste modo, as proteínas tirosina quinase (PTKs) exercem um papel fundamental na regulação do metabolismo, expressão gênica, crescimento, divisão e diferenciação celular. Uma vez fosforiladas, PTKs recrutam proteínas parceiras (Grb2, Shc, Ras, Sos, etc) para formar complexos de sinalização primários (ESCs), que ativam vias de sinalização específicas dentro da célula. Em muitos casos quinases e fosfatases atuam juntas nestes processos. Neste contexto, as FGFRs são PTKs "chave" de muitos dos processos de sinalização cuja atividade aberrante causa uma variedade de cânceres e má formação fetal. Recentes estudos mostram que Grb2 é um importante regulador de FGFR2 e Shp2, prevenindo suas atividades quinase e fosfatase respectivamente antes da estimulação extracelular. Quando fosforilada, Grb2 dissocia-se de FGFR2, resultando no início de ambas as atividades quinase e fosfatase. A desfosforilação de Grb2 por Shp2 resgata o complexo formado previamente, reimpondo o controle sobre FGFR2. Grb2 é, portanto, uma reguladora global destas reações mutuamente dependentes e junto com FGFR2 e Shp2 é um alvo em potencial para o desenvolvimento de fármacos. Desta maneira, a caracterização das bases de interação entre estas proteínas são de suma importância para o entendimento dos processos que levam ao desenvolvimento de câncer. O objetivo deste trabalho é caracterizar as atividades quinase e fosfatase de FGFR2 e Shp2 respectivamente sobre Grb2 e posteriormente a interação mutua de FGFR2 e Shp2. Para este estudo serão obtidas proteínas recombinantes e o estudo será realizado utilizando técnicas de calorimetria e fluorescência para determinar parâmetros cinéticos de fosforilação e desfosforilação sobre Grb2, e possíveis mudanças conformacionais provenientes das interações mútuas entre estas proteínas.. Estes estudos contribuirão para que no futuro tenhamos uma "base" de conhecimento para o desenvolvimento de novos fármacos que vão atuar como inibidores de processos de sinalização celular que levam ao desenvolvimento de câncer. (AU)