Estudo de vias anapleróticas alternativas à glutamina em câncer de mama triplo-negativo

Resumo

O câncer de mama triplo-negativo é caracterizado pela ausência dos receptores de hormônios progesterona e estrógeno e do receptor de membrana HER2 e, por isso, não responde aos tratamentos convencionais da doença. Alterações no metabolismo celular estão ligadas ao surgimento e progressão deste tipo tumoral, sendo, portanto, novas promessas na busca de alvos terapêuticos. O consumo excessivo de glutamina é parte das alterações metabólicas sofrida por diversos tipos tumorais, sendo importante para a anaplerose ou reposição dos intermediários do Ciclo do Ácido Tricarboxílico (TCA) que são utilizados em vias biossintéticas da célula. Estudos realizados durante o mestrado da proponente deste projeto mostraram que a dependência de glutamina é variada em linhagens de câncer de mama triplo-negativo. Ensaios de qPCR de células privadas de glutamina ou de células pouco dependentes deste aminoácido versus células dependentes, mostraram o aumento na expressão de genes relacionados principalmente às vias de glicólise/gliconeogênese e metabolismo de lipídeo (²-oxidação), sugerindo a participação dessas vias na compensação da falta de glutamina (ou baixa necessidade deste nutriente) para manutenção do ciclo do TCA. O presente projeto tem como objetivo o estudo dessas vias nas linhagens MDA-MB-157, MDA-MB-468 e BT549, pouco dependentes de glutamina. Como estratégia, realizaremos knock down dos genes que tiveram suas expressões aumentadas na ausência de glutamina em cada linhagem e avaliaremos o impacto desse bloqueio em adição à ausência de glutamina por ensaios de proliferação, apoptose, formação de colônia e migração/invasão. Para o estudo dos nutrientes responsáveis pela compensação da ausência de glutamina e os processos celulares em que esses estão envolvidos, utilizaremos cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS), utilizando nutrientes marcados (13C e 15N). (AU)