Efeito da angiotensina II nos mecanismos celulares envolvidos na injúria de podócitos

Resumo

Têm-se observado que a angiotensina II (Ang II) em concentrações elevadas no plasma ou no tecido renal induz entre outras coisas, alterações na hemodinâmica renal, injúria glomerular severa, aumento da síntese de componentes da matriz extracelular glomerular, estresse oxidativo e apoptose de células glomerulares, incluindo as mesangiais e os podócitos. O aumento das Espécies Reativas de Oxigênio (ERO) induz aumento da atividade da caspase 3, proteína mediadora de apoptose. Durante a apoptose, a ativação da isoforma 1 do trocador Na+/H+ (NHE1) é importante, uma vez que essa proteína se associa aos eventos celulares tais como controle da proliferação, migração e resistência a apoptose, bem como a manutenção do fenótipo celular. Em vários modelos celulares a Ang II regula a atividade de NHE1 através da ativação de proteínas sinalizadoras como ezrina, mitogen-activated protein kinase (p38MAP kinase). Os podócitos possuem um Sistema Renina-Angiotensina (SRA) próprio, expressam os receptores AT1 e AT2 para Ang II e NHE1. Além disso, o NHE1 faz interações com as integrinas da membrana basal dos processos podais para garantir a estabilidade do sistema podocitário na membrana basal glomerular. A nossa hipótese é que a Ang II induzindo aumento das espécies reativas de oxigênio, pode ativar a apoptose nessas células e nessa condição, o NHE1 que também é ativado pela Ang II via p38MAPK, poderá contribuir para a resistência celular ao estímulo apoptótico. Assim, o objetivo geral deste estudo é investigar em podócitos, o papel da Ang II via receptores AT1 na indução de estresse oxidativo e a sua relação com apoptose, síntese de fatores e proteínas que contribuem para a adesão dos processos podais na membrana basal glomerular e os eventos intracelulares associados à atividade do NHE1. Métodos: Serão utilizados podócitos de camundongos em cultura e os grupos experimentais serão: controle ou tratados com Ang II (10-12, 10-9 e 10-8 M) e/ou Losartan (10-5 M, antagonista do receptor AT1). Serão realizados ensaios para avaliar apoptose e produção de ânion superóxido; reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para avaliar a expressão de RNAm para os genes de integrina ²1, nefrina, podocina, laminina 521, fator de necrose tumoral alfa (TNF-±), interleucina 6 e GAPDH (gene endógeno); avaliação do pH intracelular por método de fluorescência (para investigar a atividade de NHE1) e a expressão de proteínas será avaliada por meio de Western blot. Desafio: Com esse estudo esperamos contribuir para os esclarecimentos das vias de sinalização intracelular envolvidas com a participação dos podócitos na injúria glomerular induzida por Ang II em patologias como a hipertensão arterial. (AU)