Otimização da atividade proteolítica de bactérias láticas contra proteínas alergênicas do leite e avaliação da capacidade de ligação dos hidrolisados com IgE específica

Resumo

A Alergia às Proteínas do Leite de Vaca (APLV) é um problema de saúde pública que afeta 2,5% das crianças menores de três anos. A APLV está relacionada com o reconhecimento e ligação da Imuniglobulina E (IgE) aos epítopos presentes nas proteínas do leite. Uma alternativa para reduzir a resposta antigênica destas proteínas seria sua hidrólise por bactérias láticas (BAL) proteolíticas, capazes de quebrar os epítopos responsáveis pelo reconhecimento e ligação com a IgE. Entretanto, para viabilizar a aplicação de BAL proteolíticas no desenvolvimento de produtos lácteos hipoalergênicos, é necessário garantir que a hidrólise protéica alcance um grau suficiente para impedir a ligação dos hidrolisados com a IgE. Estes altos índices de hidrólise podem ser alcançados através da otimização das condições de fermentação, ou ainda da combinação de diferentes cepas proteolíticas, as quais produzem diferentes proteases, atuando sobre diferentes sítios na cadeia peptídica. Além disso, também é necessário avaliar a redução real na capacidade de ligação dos hidrolisados com IgEs específicas. O presente projeto de pós-doutorado tem por objetivo otimizar a atividade de cepas proteolíticas de BAL contra as principais proteínas responsáveis pela APLV, além de avaliar a capacidade de ligação dos hidrolisados, obtidos sob condições ótimas para a proteólise, com IgE específica presente no soro de pacientes portadores de APLV. Os experimentos serão conduzidos utilizando-se cepas proteolíticas obtidas na primeira etapa do projeto, desenvolvida na FCF/USP. Para a otimização da atividade proteolítica, as melhores condições de hidrólise serão avaliadas para cada cepa individualmente e também para pools, preparados cultivando-se duas ou mais cepas em conjunto. A extensão da hidrólise protéica será observada através de eletroforese SDS-PAGE, seguida de confirmação por FR-HPLC. A resposta antigência dos hidrolisados a IgEs específicas será avaliada por ELISA competitivo, utilizando-se o soro de pacientes portadores de APLV. (AU)