Expressão de opsinas e melanopsinas em retinas de serpentes: genética molecular e imunohistoquímica

Resumo

Este projeto visa responder importantes questões sobre a genética molecular e a morfologia da retina de serpentes em continuidade aos trabalhos realizados pela Dra. Einat Hauzman. Apesar da grande diversidade de espécies de serpentes poucos estudos avaliaram as especializações de seus sistemas sensoriais. Durante seu mestrado (processo Fapesp 2006/58514-6) foram analisados a densidade e distribuição de fotorreceptores e de células da camada de células ganglionares (CCG) de duas espécies de serpentes diurnas. No projeto de doutorado (processo Fapesp 2010/51670-8), os fotorreceptores e células da CCG foram quantificados em retinas de 20 espécies de serpentes diurnas e noturnas, e os genes de pigmentos visuais foram sequenciados a partir de RNAm de retinas de 17 espécies de serpentes. Diferentes tipos de fotorreceptores foram marcados pela técnica de imunohistoquímica, com anticorpos contra opsinas sensíveis a comprimentos de onda curtos, que marcaram cones UV (grupo SWS1), e contra opsinas sensíveis a comprimentos de onda longos, que marcaram cones L (grupo LWS). Entretanto, não foi possível marcar o fotopigmento Rh1, também expresso em retinas de serpentes, devido à ausência de anticorpos específicos para esta proteína. Este trabalho propõe a produção de um anticorpo específico contra o fotopigmento Rh1 e sua utilização para análise da densidade e distribuição dos fotorreceptores contendo este pigmento visual. Para investigar a possibilidade de co-expressão de opsinas, marcações duplas ou triplas com os diferentes anticorpos anti-opsinas serão realizadas. Finalmente, será também investigada a expressão dos genes de melanopsinas, fotopigmentos presentes em células ganglionares da retina interna, responsáveis por receber diretamente a informação luminosa do ambiente e gerar uma variedade de respostas à luz, como a regulação de ritmos circadianos e o reflexo pupilar. (AU)