Aspectos morfológicos, moleculares e funcionais da interação entre o receptor P2X7 e a panexina-1 nas células gliais entéricas após a isquemia/reperfusão intestinal

Resumo

As células gliais entéricas são consideradas apoio estrutural para os neurônios entéricos, no entanto evidências recentes indicam uma interação na comunicação glia-neurônio que contribui para a manutenção neuronal e, que alterações funcionais ou morfológicas, podem exercer um papel nas disfunções gastrintestinais. A isquemia e reperfusão intestinal são eventos clínicos graves com elevada taxa de mortalidade que ocorrem em transplante, embolismo e obstrução intestinal que por consequência afetam os neurônios e células gliais entéricas. O ATP está envolvido na regulação de diversos processos fisiopatológicos e, pode ser co-liberado com outros neurotransmissores e sua sinalização extracelular pode acontecer via receptores da família P2X e P2Y. Algumas características foram descritas para panexina-1 como, mediar à sinalização purinérgica no sistema nervoso, através da sinalização de receptores ionotrópicos e metabotrópicos. O receptor P2X7 tem papel em diversos eventos intracelulares e atua conjuntamente com a panexina-1. Este projeto visa estudar os efeitos da isquemia/reperfusão intestinal (I/R) sobre as células gliais entéricas do íleo de ratos que expressam o receptor P2X7 e panexina-1. A isquemia intestinal será obtida pela obstrução do fluxo sanguíneo dos vasos ileais no período de 45 minutos, seguida por períodos de reperfusão de 24 horas, 14 dias e 28 dias. No grupo sham não ocorrerá a oclusão dos vasos ileais. Após a I/R serão utilizados os antagonistas do receptor P2X7 (Brilliant Blue G - BBG) e da panexina-1 (Probenecida). Os tecidos serão preparados para métodos de imunohistoquímica de duplas/triplas marcações do receptor P2X7, S100B (pan glial) ou GFAP (pan glial) e Hu (pan neuronal) e da panexina-1. As análises qualitativa e quantitativa serão feitas em microscópio de fluorescência e de confocal de varredura a laser. Também, serão feitas análises de ultra-estrutural, expressão proteica por western blotting (receptor P2X7, panexina-1, S100B/GFAP e Hu) e expressão gênica. Além disso, será estudada a participação das vias de sinalização das proteínas quinases ativadas por mitógeno (MAPK) ERK-1/2, p38 MAPK, NF-KB e o NFAT e da morte celular como a caspase 3. Serão realizados ensaios imunoenzimáticos das citocinas IL-1B, IL-6, IL-10 e TNF-alfa e análises dos aspectos funcionais da motilidade intestinal nos grupos sham e I/R. O entendimento do papel da glia entérica e da interação do receptor P2X7 com a panexina-1 pode contribuir em estratégias terapêuticas para os transtornos gastrintestinais causados pela isquemia e reperfusão intestinal. (AU)