Verificação de proteínas da saliva candidatas a marcadores em CEC e sua correlação com o prognóstico

Resumo

O câncer bucal de maior incidência em todo o mundo é o carcinoma de células escamosas (CEC), totalizando mais de 90% de todos os casos de câncer na cavidade oral. O fator prognóstico mais utilizado é o estádio clínico do paciente, baseando-se na classificação TNM (Classificação de tumores malignos). Entretanto, esse sistema de classificação não é perfeito, principalmente porque tumores com morfologia e estágio similares apresentam diferentes comportamentos devido às características biológicas distintas. Assim, a pesquisa de marcadores moleculares envolvidos no desenvolvimento de doenças humanas tem sido alvo de intensas pesquisas. A descoberta de que na saliva encontram-se perfis moleculares indicadores de doenças sistêmicas favoreceu o desenvolvimento de uma nova perspectiva de diagnóstico não invasivo: o diagnóstico salivar baseando-se na proteômica. Em estudos de proteômica baseada na descoberta desenvolvidos pelo nosso grupo de pesquisa, (1) a abundância diferencial de 137 proteínas secretadas foi demonstrada pela espectrometria de massas, em linhagem celular de carcinoma quando comparada à uma linhagem celular não cancerosa (Kawahara et al., submetido à BMC Biology) e (2) a abundância diferencial de 44 proteínas foi verificada na saliva de pacientes com CEC (Winck et al., submetido à Nature Scientific Reports). A partir desses dados, em estudo posterior de proteômica baseada em alvos, verificamos a abundância de 14 proteínas na saliva de pacientes com CEC e a abundância diferencial de 10 dessas proteínas foi confirmada (Kawahara et al., submetido ao Journal of Proteome Research). Entretanto, apesar desses estudos indicarem candidatos potenciais a marcadores, sua correlação com o prognóstico não pode ser realizada devido à distribuição heterogênea dos pacientes entre os diferentes estadiamentos. Além disso, a alta taxa de mortalidade comprometeu o cálculo de sobrevida desses pacientes. Desta maneira, o objetivo principal deste projeto é a quantificação de um painel de proteínas candidatas na saliva de pacientes com CEC e a correlação com o prognóstico e risco de metástase regional do tumor de grupos definidos. A quantificação de proteínas será feita através do espectrômetro de massas LTQ Orbitrap Velos (Thermo Fisher Scientific) acoplado com cromatografia líquida de ultra-performance (LC-MS/MS). Os candidatos a marcadores serão validados por imunohistoquímica (tissue microarray) para avaliar se a expressão aumentada na saliva é reflexo da expressão aumentada em tecidos de CEC e, consequentemente, secretada pelo tecido ou se está aumentada como em resposta do paciente à presença do tumor. As proteínas verificadas serão analisadas em software específico para obtenção de informações sobre sua rede de interação, localização celular e processos biológicos desempenhados para ajudar no direcionamento dos estudos funcionais de tais moléculas. Espera-se que este projeto indique um painel de proteínas marcadoras de CEC, contribuindo na avaliação prognóstica, no perfil de risco do paciente e na possibilidade de recorrência e também guiar para estratégias terapêuticas de intervenção.