Estudos sobre a melatonina na função e qualidade de complexos cumulus-oócitos bovinos

Resumo

A produção in vitro (PIV) de embriões em bovinos é uma importante ferramenta na produção animal e para o melhoramento genético dos rebanhos, o que na economia brasileira tem importância particular dado o peso do rebanho bovino para o mercado interno e externo. Além disso, o Brasil é o maior produtor mundial de embriões bovinos de PIV. Apesar disso, a PIV ainda apresenta desafios, visto que a produção ainda está aquém do desejável e os embriões ainda têm menor qualidade e capacidade de suportar a criopreservação. Assim ainda há necessidade de melhorias ao processo e a melhor compreensão dos fatores envolvidos na eficiência da técnica é essencial para o seu aprimoramento. Dos diversos fatores que podem interferir nos resultados da PIV, a etapa de maturação in vitro (MIV) durante a PIV tem papel relevante. O processo de maturação oocitária tem impacto na qualidade e competência do oócito e no desenvolvimento embrionário subsequente. A melatonina é um hormônio com diversas funções, que além de ter atividade antioxidante e antiapoptótica, também é capaz de influenciar diferentes vias de sinalização celular. Recentemente (processo 2010/18023-9) observamos que a melatonina está presente no fluido folicular bovino (Coelho et al, 2013) e que durante a MIV ela estimula a retomada da maturação nuclear e a maturação citoplasmática (produção de embriões PIV) em níveis similares ao do FSH. Além disso, influenciou a expressão de genes de enzimas antioxidantes e reduziu os índices de apoptose em células do cumulus (CC), mostrando ter efeitos não só sobre o oócito (OO) como sobre suas células do cumulus (Valerino da Cunha, 2014). Como essas células são essenciais para o desenvolvimento oocitário, propomos estudar a influência do receptor de melatonina (MT1) nas funções das mesmas. A investigação do papel do MT1 será realizada por silenciamento gênico usando RNA de interferência (siRNA). Nesse estudo serão avaliados: 1) o perfil de expressão temporal do MT1 nas CC ao longo da MIV para determinar o melhor momento para o silenciamento; 2) as condições de lipofecção (tempo de exposição e concentração do lipofector) das CC em complexos cumulus-oócitos (CCOs) durante a MIV; 3) o efeito da perda de função do MT1 nas CC sobre expansão, expressão dos genes antioxidantes (SOD1 e SOD2) e índice de apoptose nas CC e 4) as consequências sobre os oócitos, em relação às taxas de maturação nuclear, níveis de espécies reativas de oxigênio (ROS) e competência para o desenvolvimento após fecundação in vitro (FIV). (AU)