Determinação do perfil de metilação de células-tronco hematopoéticas pré-leucêmicas e leucêmicas de leucemia mielóide aguda pelo ensaio "single cell dna methylation"

Resumo

As leucemias mielóides agudas (LMA) são desordens hematopoéticas de origem clonal, heterogêneas caracterizadas pelo mieloacúmulo de células com estágios de diferenciação incompletos. A categorização das LMA define as LMA com risco Favorável, Intermediário I, Intermediário II e Adverso, levando-se em consideração alterações cariotípicas e genéticas, sobrevida global do paciente, risco de recaída pós-terapia e a resposta dos pacientes ao tratamento. Apesar dos conhecimentos sobre a patogênese das LMA, os mecanismos envolvidos na leucemogênese permanecem desconhecidos. A presente pesquisa visa identificar o padrão de metilação de genes envolvidos no processo de renovação e pluripotência das células tronco hematopoéticas normais (HSC), pré-leucêmicas, células tronco leucêmicas (LSC) e mieloblastos de pacientes com LMA positiva para as mutações DNMT3, TET2 e IDH1/2. Devido à baixa frequência dessas subpopulações no sangue periférico dos pacientes, será desenvolvida metodologia que determinará o perfil de metilação global de amostras com pequena concentração de DNA. Para essa finalidade a metodologia "Reduced Representation Bisulfite Sequencing" (RRBS) foi a escolhida para realização do mapeamento do perfil de metilação do DNA em uma célula (Single Cell DNA Methylation Mapping). A realização desse ensaio definirá o perfil diferencial de metilação dos genes entre HSC, LSC e mieloblastos possibilitando a discriminação de genes envolvidos nos processos renovação e pluripotência em pacientes com LMA de risco intermediário.Os dados do perfil de metilação diferencial de HSC, LSC e mieloblastos gerados serão analisados em conjunto àqueles obtidos na análise da remodelação de cromatina das mesmas amostras. A análise conjunta dos dados de metilação e remodelação de cromatina das amostras investigadas proporcionará o melhor conhecimento da assinatura epigenética das HSC, LSC e mieloblastos de pacientes com LMA, o que permitirá elucidar a rede de genes envolvida na regulação da renovação celular normal e leucêmica. Os resultados desse estudo contribuirão para a descrição dos mecanismos moleculares que participam da leucemogênese da LMA com mutações DNMT3, TET2 e IDH1/2 e permitirá o desenvolvimento de novas e mais eficientes terapias nos pacientes.