Identificação de novos alvos do fator de transcrição POD1/TCF21 em culturas de células de tumores humanos

Resumo

Os fatores de transcrição, o fator esteroidogênico 1 (SF1) e o receptor homólogo de fígado (LRH1) são importantes na regulação da esteroidogênese nas adrenais e nas gônadas, respectivamente, e parece estarem envolvidos no processo de tumorigênese desses órgãos. SF1 e LRH1 podem ser regulados por vários fatores, dentre eles o fator de transcrição do tipo bHLH, POD1/TCF21. Nosso grupo descreveu que POD1/TCF21 está menos expresso em carcinomas adrenocorticais e é capaz de inibir a expressão endógena de SF1 e de enzimas esteroidogênicas, através da ligação no sitio E-box do promotor de SF1 de culturas de células provenientes de carcinomas adrenocorticais humanos e culturas normais de adrenais de rato. Resultados mais recentes mostraram que a expressão combinada da expressão dos genes POD1-BUB1B e POD1-SF1 tem valor de prognóstico em tumores adrenocorticais de pacientes adultos e pediátricos, respectivamente. Outros resultados mostraram que POD1 promove o aumento da expressão gênica de LRH1 e a diminuição da expressão de SHP, um regulador negativo de LRH1, em células de hepatocarcinomas. Em conjunto, nossos dados e de outros sugerem que POD1/TCF21 pode ter um papel mais amplo como regulador da transcrição em células tumorais, além de ser candidato a gene supressor de tumor. Além disso, o conhecimento sobre seu papel na tumorigênese adrenal e de outros tumores é ainda insipiente. Portanto, temos como hipótese que a identificação de outros alvos controlados por POD1/TCF21 podem contribuir no entendimento da sua importância e do seu papel nas células tumorais. Portanto, temos como objetivo sequenciar o DNA imunoprecipitado de células de carcinoma adrenal e hepático, respectivamente, as células NCI-H295R, ACC-T36 e HepG2, transduzidas com lentivirus com POD1, pelo método ChIP-Seq, seguido da validação dos alvos encontrados pelos métodos de ChIP-PCR, qPCR e immunoblotting. Além disso, faremos uma avaliação funcional da viabilidade, morte celular e migração após alteração do padrão de expressão dos genes alvos selecionados através do silenciamento ou superexpressão desses genes. (AU)