Avaliando o papel dependente da localização em microdomínios de GPCRs e efetores sobre a transdução de sinal usando biossensores baseados em Transferência de Energia de ressonância de Bioluminescência (BRET)

Resumo

Receptores acoplados à proteína G (GPCRs) são proteínas integrais de membrana caracterizados por uma topologia de sete ±-hélices transmembranares que medeiam um grande número de processos fisiológicos após a ligação de uma vasta gama de ligantes. Tem sido demonstrado que, durante a transdução do sinal, alterações dinâmicas podem ocorrer na localização do receptor e de efetores em microdomínios da membrana plasmática e organelas intracelulares tais como endossomos. Entre estes microdomínios, caveolae e jangadas lipídicas não caveolares estão entre os mais descritos, apesar de algumas controvérsias na literatura. Tais domínios membranares são enriquecidos em colesterol e esfingolípidos e parecem contribuir para a transdução de sinal. No entanto, uma clara compreensão dos mecanismos que regulam a localização do receptor, e de como jangadas lipídicas atuam como plataformas dinâmicas para GPCRs têm permanecido incerto devido principalmente à falta de tecnologias adequadas.Portanto, o objetivo deste projeto é desenvolver e caracterizar novos biossensores de transferência de energia de ressonância de bioluminescência (BRET) destinados a diferentes microdomínios, a fim de estudar o papel das jangadas lipídicas na dinâmica de GPCR e na regulação da transdução de sinal. Nós também iremos investigar o papel da endocitose dependente de caveolae no fenômeno da taquifilaxia do receptor AT1 utilizando biossensores de caveolae/jangadas lipídicas após ativação por análogos de AngII não taquifiláticos recentemente sintetizados pelo nosso grupo no Brasil (laboratório do Prof. Claudio Costa Neto). Acreditamos que o estudo das alterações dinâmicas na localização do receptor em microdomínios de membrana é crucial para compreender os mecanismos moleculares envolvidos na transdução de sinal e na endocitose do receptor, tendo contribuição significativa para as respostas celulares finais e, por conseguinte, relevância para a descoberta de medicamentos.