Vias de sinalização envolvidas na interação de Trypanosoma cruzi com matriz extracelular proveniente de diferentes linhagens celulares

Resumo

Nosso grupo mostrou que a adesão de formas tripomastigotas de Trypanosoma cruzi à matriz extracelular (ECM), etapa importante na invasão da célula hospedeira pelo parasita, leva a modificações pós-traducionais de proteínas do parasita. Os dados de estudos proteômicos confirmaram a fosforilação ou a S-nitrosilação de proteínas de vias metabólicas, citoesqueleto, fosfatases, quinases, e proteínas ribossomais em formas tripomastigotas incubadas com ECM comercial. Os dados apontam para o papel de diferentes quinases no processo de adesão à ECM, de aumento de síntese de algumas proteínas como, por exemplo, as da família gp85/transialidase envolvidas na invasão do parasita e de redução de enzimas da via glicolítica. As vias de sinalização desencadeadas em T. cruzi pela adesão à ECM serão estudadas medindo-se ao longo do tempo a produção de NO, cGMP, cAMP e a atividade de quinases (AMPK, PKA, MAPK, GSK-3 e PIK3) na presença de inibidores de NO sintase, fosfodiesterase e quinases. O possível papel de AMPK no metabolismo de carboidratos será verificado pelo transporte celular de glicose. Em cada caso, será analisado o perfil geral das modificações das proteínas por S-nitrosilação e fosforilação. As ECMs de três linhagens celulares previamente selecionadas por sua capacidade diferencial de adesão ou infecção por T. cruzi serão estudadas por análise proteômica quanto à sua composição, assim como será examinada a ativação ou inibição das vias de sinalização por elas desencadeadas no parasita. Para confirmar a função biológica de alguns dados do proteoma/S-nitrosilproteoma obtidos no projeto anterior, pretende-se continuar os estudos com a paraflagellar rod (PAR), proteína flagelar, que tem 3 cisteínas modificadas por S-nitrosilação, além de outras descritas na literatura. Serão estudados os níveis de síntese proteica dessa proteína e determinada a cinética das modificações pós-traducionais (S-nitrosilação, sumoilação e ubiquitinação) produzidas pela incubação com ECMs. Pretende-se com este projeto ampliar o conhecimento da sinalização envolvida na adesão de formas tripomastigotas a ECMs, uma das etapas determinantes na disseminação do T. cruzi no hospedeiro. (AU)