Avaliação do papel de duas proteínas de Leptospira interrogans na patogencidade e na atividade de imunoproteção em modelo animal

Resumo

A leptospirose é uma zoonose mundialmente disseminada causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. A doença acomete humanos e animais. Nos centros urbanos, os ratos são os disseminadores da leptospirose pois albergam as bactérias nos rins, excretando-as vivas continuamente contaminando água e solo. No Brasil, as epidemias mais frequentes ocorrem durante o período de chuvas, época de alagamentos que associado às condições precárias de saneamento favorecem o contato com ambiente contaminado. O entendimento dos mecanismos de patogenicidade das leptospiras é fundamental para bloquear a ação deste patógeno. Nesse sentido, a identificação de proteínas da membrana externa conservadas são os principais alvos de pesquisa, visto que essa localização de superfície facilita a interação com o hospedeiro. Neste sentido, o projeto tem como objetivo caracterizar o envolvimento de 2 proteínas de superfície de Leptospira interrogans, LIC11664 e LIC10499, suas interações à células endoteliais e epiteliais em cultura, bem como a componentes do hospedeiro. As sequencias codificadoras terão seus genes clonados e expressos em linhagens de E. coli. As proteínas recombinantes serão purificadas por cromatografia de afinidade a metal e analisadas quanto a sua estrutura pela técnica de dicroísmo circular. Animais BALB/c serão imunizados com as proteínas recombinantes para produção de antissoro policlonal e os soros obtidos serão usados em diversos experimentos para sondar a presença destas proteínas. Estas, na sua forma recombinante, serão avaliadas quanto à reatividade a componentes do hospedeiro, como matriz extracelular e do plasma, como plasminogênio e fibrinogênio, e componentes do sistema complemento. As proteínas serão analisadas quanto a interações com células endoteliais e epiteliais em cultura e quanto as atividades de imunoproteção em modelo animal. Estas atividades serão validadas com a obtenção de mutantes de leptospiras saprófitas e patogênicas. Estes resultados caracterizarão estas proteínas quanto ao papel na patogenicidade das leptospiras e quanto o potencial para o desenvolvimento de vacinas. (AU)