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(Referência obtida automaticamente do Web of Science, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores.)

Specific calpain activity evaluation in Plasmodium parasites

Texto completo
Autor(es):
Gomes, Mayrim M. [1, 2] ; Budu, Alexandre [3] ; Ventura, Priscilla D. S. [1] ; Bagnaresi, Piero [3] ; Cotrin, Simone S. [3] ; Cunha, Rodrigo L. O. R. [4] ; Carmona, Adriana K. [3] ; Juliano, Luiz [3] ; Gazarini, Marcos L. [1]
Número total de Autores: 9
Afiliação do(s) autor(es):
[1] Univ Fed Sao Paulo, Dept Biociencias, Santos, SP - Brazil
[2] Univ Fed Sao Paulo, Escola Paulista Med, Dept Microbiol Immunol & Parasitol, Sao Paulo - Brazil
[3] Univ Fed Sao Paulo, Dept Biofis, Sao Paulo - Brazil
[4] Univ Fed ABC, Ctr Ciencias Nat & Humanas, Santo Andre, SP - Brazil
Número total de Afiliações: 4
Tipo de documento: Artigo Científico
Fonte: Analytical Biochemistry; v. 468, p. 22-27, JAN 1 2015.
Citações Web of Science: 5
Resumo

In the intraerythrocytic trophozoite stages of Plasmodium falciparum, the calcium-dependent cysteine protease calpain (Pf-calpain) has an important role in the parasite calcium modulation and cell development. We established specific conditions to follow by confocal microscopy and spectrofluorimetry measurements the intracellular activity of Pf-calpain in live cells. The catalytic activity was measured using the fluorogenic Z-Phe-Arg-MCA (where Z is carbobenzoxy and MCA is 4-methylcoumaryl-7-amide). The calmodulin inhibitor calmidazolium and the sarcoplasmic reticulum calcium ATPase inhibitor thapsigargin were used for modifications in the cytosolic calcium concentrations that persisted in the absence of extracellular calcium. The observed calcium-dependent peptidase activity was greatly inhibited by specific cysteine protease inhibitor E-64 and by the selective calpain inhibitor ALLN (N-acetyl-t-leucyl-L-leucyl-L-norleucinal). Taken together, we observed that intracellular Pf-calpain can be selectively detected and is the main calcium-dependent protease in the intraerythrocytic stages of the parasite. The method described here can be helpful in cell metabolism studies and antimalarial drug screening. (C) 2014 Elsevier Inc. All rights reserved. (AU)

Processo FAPESP: 09/53840-0 - Sistema de fluorescência para investigações dos aspectos fisiológicos e fisiopatológicos em modelos celulares
Beneficiário:Adriana Karaoglanovic Carmona
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Programa Equipamentos Multiusuários
Processo FAPESP: 11/15287-8 - Estudo da atividade proteolítica no Plasmodium e modulação do sistema calicreína-cinina em fígados infectados
Beneficiário:Mayrim Machado Gomes Smaul
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Mestrado
Processo FAPESP: 12/50475-2 - Estudo de enzimas proteolíticas envolvidas em processos fisiológicos e fisiopatológicos
Beneficiário:Adriana Karaoglanovic Carmona
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo FAPESP: 13/12913-0 - Cálcio- calmodulina de Plasmodium Falciparum: identificação de ligantes e participação na sinalização parasita-hospedeiro
Beneficiário:Alexandre Budu
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Processo FAPESP: 09/54598-9 - Proteólise intracelular em parasitas da malária: caracterização e inibição de proteases em um novo ensaio para o ‘screening’ de drogas antimaláricas
Beneficiário:Marcos Leoni Gazarini Dutra
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Apoio a Jovens Pesquisadores
Processo FAPESP: 10/09264-2 - Participação da fosforilação e homeostase de cálcio na modulação da atividade proteolítica intracelular em Plasmodium Chabaudi
Beneficiário:Mayrim Machado Gomes Smaul
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica