Specific calpain activity evaluation in Plasmodium parasites

Autor(es)

Gomes, Mayrim M. ^{[1, 2]} ; Budu, Alexandre ^[3] ; Ventura, Priscilla D. S. ^[1] ; Bagnaresi, Piero ^[3] ; Cotrin, Simone S. ^[3] ; Cunha, Rodrigo L. O. R. ^[4] ; Carmona, Adriana K. ^[3] ; Juliano, Luiz ^[3] ; Gazarini, Marcos L. ^[1]

Afiliação do(s) autor(es)

^[1] Univ Fed Sao Paulo, Dept Biociencias, Santos, SP - Brazil

^[2] Univ Fed Sao Paulo, Escola Paulista Med, Dept Microbiol Immunol & Parasitol, Sao Paulo - Brazil

^[3] Univ Fed Sao Paulo, Dept Biofis, Sao Paulo - Brazil

^[4] Univ Fed ABC, Ctr Ciencias Nat & Humanas, Santo Andre, SP - Brazil

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: Analytical Biochemistry; v. 468, p. 22-27, JAN 1 2015.
• Citações Web of Science: 5

Resumo

In the intraerythrocytic trophozoite stages of Plasmodium falciparum, the calcium-dependent cysteine protease calpain (Pf-calpain) has an important role in the parasite calcium modulation and cell development. We established specific conditions to follow by confocal microscopy and spectrofluorimetry measurements the intracellular activity of Pf-calpain in live cells. The catalytic activity was measured using the fluorogenic Z-Phe-Arg-MCA (where Z is carbobenzoxy and MCA is 4-methylcoumaryl-7-amide). The calmodulin inhibitor calmidazolium and the sarcoplasmic reticulum calcium ATPase inhibitor thapsigargin were used for modifications in the cytosolic calcium concentrations that persisted in the absence of extracellular calcium. The observed calcium-dependent peptidase activity was greatly inhibited by specific cysteine protease inhibitor E-64 and by the selective calpain inhibitor ALLN (N-acetyl-t-leucyl-L-leucyl-L-norleucinal). Taken together, we observed that intracellular Pf-calpain can be selectively detected and is the main calcium-dependent protease in the intraerythrocytic stages of the parasite. The method described here can be helpful in cell metabolism studies and antimalarial drug screening. (C) 2014 Elsevier Inc. All rights reserved. (AU)

• Processo FAPESP: 12/50475-2 - Estudo de enzimas proteolíticas envolvidas em processos fisiológicos e fisiopatológicos
• Beneficiário: Adriana Karaoglanovic Carmona
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Processo FAPESP: 10/09264-2 - Participação da fosforilação e homeostase de cálcio na modulação da atividade proteolítica intracelular em Plasmodium chabaudi
• Beneficiário: Mayrim Machado Gomes Smaul
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Processo FAPESP: 11/15287-8 - Estudo da atividade proteolítica no Plasmodium e modulação do sistema calicreína-cinina em fígados infectados
• Beneficiário: Mayrim Machado Gomes Smaul
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Processo FAPESP: 13/12913-0 - Cálcio- calmodulina de Plasmodium falciparum: identificação de ligantes e participação na sinalização parasita-hospedeiro
• Beneficiário: Alexandre Budu
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Processo FAPESP: 09/54598-9 - Proteólise intracelular em parasitas da malária: caracterização e inibição de proteases em um novo ensaio para o ‘screening’ de drogas antimaláricas
• Beneficiário: Marcos Leoni Gazarini Dutra
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores
• Processo FAPESP: 09/53840-0 - Sistema de fluorescência para investigações dos aspectos fisiológicos e fisiopatológicos em modelos celulares
• Beneficiário: Adriana Karaoglanovic Carmona
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Programa Equipamentos Multiusuários